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hsa-mir-98-5p在齐顺保利尔治疗ITP中的差异表达研究

摘要目的:检测hsa-miR-98-5p在ITP患者经蒙药齐顺保利尔治疗前后的差异性表达,并进行靶基因预测和基因功能描述,探索hsa-miR-98-5p在蒙药齐顺保利尔有效治疗ITP的过程中所起的作用。<br>  方法:首先,采用病例回顾性分析的方法,收集2013年5月到2014年5月期间就诊于内蒙古民族大学附属医院血液科的单独采用蒙药治疗的32例ITP患者病例并分析相关的临床资料,资料分析证明了蒙药齐顺保利尔治疗ITP有效。然后,对2014年6月~2015年6月期间在我院血液科被确诊为ITP并排除其他自身免疫性疾病或其他慢性疾病病史的43例ITP患者和同期收集38例健康志愿者并采集血样。从43例经初治被诊断为特发性血小板减少性紫癜患者当中随机抽出4名,并从38例健康者当中随机选出4名作为对照组。每一名入组者被采集静脉血5ml并用EDTA抗凝管存储。采用Ficoll-Paque(Sigma,St.Louis,MO)分离外周血样中单个核细胞,利用TRIzol等相关试剂提取各个样本总RNA,其完整性通过凝胶电泳来评估,总RNA的质量采用NanoDrop2000分光光度计进行检测。采用Illumina提供的Truseq小RNA样本制备试剂盒,制备编码小RNA包括mi RNAs在内的cDNA库并用Illumina Hiseq2000对cDNA进行测序和过滤,并用BGI公司提供的SOAP软件绘制出与ITP相关的基因组,采用Mirdeep从无名的序列中筛选出新的miRNAs,通过三组测序结果的相互比较找出差异性表达的microRNAs,包括hsa-miR-98-5p。最后通过扩大样本量,利用RT-PCR技术对显著差异表达的hsa-miR-98-5p在其余的39例ITP和34例健康者中进行相关结果验证。<br>  利用Illumina HiSeqTM2000对hsa-miR-98-5p进行注释,并将差异性表达的hsa-miR-98-5p进行靶基因的预测以及GO分析。<br>  结果:1.ITP治疗前组与正常组相比,共有6个miRNAs在外周血单个核细胞中差异表达。ITP治疗前组中有2个miRNAs表达上调,4个表达下调,但是没有发现hsa-miR-98-5p;<br>  2.蒙药齐顺保利尔治疗后的ITP组与正常组相比,共有19个miRNAs在外周血单个核细胞中差异表达。蒙药齐顺保利尔治疗后的ITP组中有6个表达下调,13个miRNAs表达上调,其中就包括hsa-miR-98-5p;<br>  3.蒙药齐顺保利尔治疗后的ITP组与治疗前组相比,共有44个miRNAs在外周血单个核细胞中差异表达。其中,在ITP治疗后组中有9个表达下调,35个表达上调,其中治疗后表达上调的hsa-miR-98-5p是正常对照的6.593倍;<br>  4.靶基因预测发现hsa-miR-98-5p作用的靶基因包BCL2L1,CASP3,TNFSF10,CD86,IL6,ITGB3,FAS,FASLG,II10,IL18R1。<br>  结论:1.齐顺保利尔治疗ITP临床症状减轻,血小板数量明显增加,没有产生明显副作用,治疗效果显著。<br>  2.齐顺保利尔可能通过调控hsa-miR-98-5p上调表达达到治疗目的。<br>  3.预测的靶基因进行基因功能分析表明:hsa-miR-98-5p参与了细胞的凋亡、T细胞和B细胞的活化和分化,血小板膜表面Ⅲa糖蛋白的表达以及APO-1/CD95 FAS受体和抗原配体,IL10以及IL18等配体受体的表达。

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