金花茶分子分类和山茶属植物遗传多样性研究-论文-万方医学网

金花茶分子分类和山茶属植物遗传多样性研究

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摘要在用CTAB法抽提出茶属植物总DNA均未成功的基础上,经多次实验使用改良的CTAB法来抽提,即在抽提前加入抗氧化剂β-巯基乙醇,并使用冷冻的异戊醇来沉淀DNA,获得了较好的抽提效果,其纯度和得率完全能满足常规的分子生物学操作.确立了山茶属植物合适的RAPD反应体系,反应液:DNA template 4.0ul;10x Buffer 2.0ul;2mM dNTPs 1.0ul;25mM MgCl<,2>1.4ul 10mM primer 2.0ul;5U Taq Polymerase 0.2ul;ddH<,2>O 9.4ul;Total 20.0ul,PCR扩增程序:94℃ 5min;94℃ 1min,35℃ 1min,72℃ 2min,45个循环;72℃ 7min.并从160种10mer寡核苷酸随机引物中筛选出具有多态性引物15种.运用该15种引物对山茶属金花组16种植物基因组DNA进行RAPD分析,共检测出96个位点,其中单态位点15个,占15.6﹪,多态性点81个,占84.4﹪.用UPGMA法对各分类群间的Jaccard相似性系数和遗传距离进行聚类分析,建立了系统聚类图.结果表明,16种分类群间的遗传距离较小,均属近缘种,其遗传基础较窄,这与金花茶植物狭窄的地理分布范围相关.陇瑞金花茶(C.longruiersis H.T.C)和弄港金花茶(C.longgangensis)相似性系数量大、遗传距离最小,宜归为一种,扶绥金花茶(C.fusuiensis S.Y.Liang)与其它15种金花茶亲缘关系最远.