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摘要目的:在肾透明细胞癌细胞系786-O细胞株中瞬时敲低Kruppel样因子8(Kruppellike factor8，KLF8)的表达能够抑制786-O细胞系的增值，但KLF8在肾癌中的作用机制并不清楚，既往的研究表明，在肾癌中VHL突变导致的VEGF/VEGFR、PDGFβ/PAGFRβ、TGF/EGFR过度激活，在肾癌的发生发展中起重要作用，本研究旨在探讨过表达KL8基因对肾透细胞癌细胞系769-P的增值能力的影响，以及该作用是否与上述经典通路有关，其作用靶点是什么。<br>　　方法:应用慢病毒包装系统构建重组KLF8质粒，与空载体质粒分别转染293V细胞进行病毒包装，再分别感染769-P细胞株，利用实时荧光定量PCR技术(Real TimePCR)及Western blot技术检测769-P细胞KLF8的表达情况。根据769-P细胞感染重组KLF8慢病毒或空载体将其分为两组进行功能实验，用平板克隆实验及MTS方法检测769-P细胞增殖能力的变化，应用流式细胞学技术检测细胞周期变化。应用Western blot技术检测潜在靶基因在过表达KLF8组和转染空质粒组中的表达情况。应用siRNA(small interference RNA)技术敲低FLT1后根据FLT1蛋白表达量筛选出敲低效果最明显的siRNA。分别在转染pLV-EGFP(2A)Puro-KLF8质粒和pLV-EGFP(2A) Puro空载体质粒的769-P细胞中转染siFLT1，再应用平板克隆实验，MTS实验检测769-P细胞株增殖能力的变化。<br>　　结果:①成功筛选出高表达KLF8基因的769-P细胞株，转染pLV-EGFP(2A)Puro-KLF8组的KLF8蛋白表达较对照组显著上调。②平板克隆实验:转染pLV-EGFP(2A)Puro-KLF8组较空载体组克隆数明显增多(P＜0.05)。③MTS实验，在48h、72h、96h的检测中，实验组在490nm吸光值显著升高(P＜0.05)。④流式细胞学检测细胞周期，转染pLV-EGFP(2A) Puro-KLF8组G0/G1细胞比例明显减少S期细胞比例增加。⑤Western blot检测发现FLT1在实验组中表达显著上升。⑥应用siFLT1敲低FLT1后，769-P细胞株的增值能力明显下降，平板克隆实验:769P-KLF8+control克隆数最多，769P-KLF8+siFLT1与769P-EMPTY+control组次之,769-P-EMPTY+siFLT1克隆数最少;MTS:769P-KLF8+control组于72h，96h时间点在490nm处光吸收值最高，769P-KLF8+siFLT1与769P-EMPTY+control组次之，769-P-EMPTY+siFLT1最低(P＜0.05)。<br>　　结论:KLF8基因过表达能够促进肾透明细胞癌细胞系769-P的增值，并且该增值效应依赖于FLT1（即VEGFR1）的表达升高。