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摘要目的：<br>　　在法医检案中猝死日益增多,对猝死的研究已经有了足够重视。心源性猝死（Sudden Cardiac Death,SCD）在成人的猝死原因中占首位。急性心肌梗死(AcuteMyocardial Infaction,AMI)发生恶性的、致命性的心律失常是心源性猝死的主要原因之一。急性心肌梗死(AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死。在法医鉴定中,有部分心源性猝死者虽然通过系统尸检及组织形态学检验仍无法明确具体死因,所以,进一步发现和研究梗死心肌中的标志物的表达、变化及作用,了解标志物与心肌梗死后恶性、致命性心律失常的关系,可以为法医学诊断提供非常重要的线索和依据。<br>　　心肌组织中缝隙连接蛋白(Connexin,Cx)是一个大家族,包括许多种类,分子量在26～56KD之间,其维持着不同心肌细胞间的“电偶联”功能的正常进行,参与心肌细胞间电兴奋的形成、化学信号的传递,维持器官功能正常运行。本实验将通过免疫组化法及qRT-PCR检测缝隙连接蛋白45（Connexin45,Cx45）、缝隙连接蛋白40（Connexin40,Cx40）及肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor, TNF-a)在梗死心肌中的表达情况,探讨三者的作用及相关性,希望可以以此为法医学中心源性猝死死因诊断提供更科学、准确的诊断手段。<br>　　方法：<br>　　1.收集大连医科大学临床病理研究中心2013-2015年尸检标本,从中选取由于猝死造成的死亡病例共80例。本实验共分为三组:a、早期心肌缺血猝死组30例;b、晚期心肌梗死猝死组30例;c、正常心肌组20例。部分实验的心肌组织样本通过福尔马林溶液10％固定,再对各组标本进行石蜡包埋,免疫组化染色;部分组织为尸检后冻存的心肌标本,-80℃低温保存,以备提取mRNA用。<br>　　2.本实验主要采用免疫组织化学的方法,通过DAB染色法检测不同分组心肌组织中Cx45、Cx40以及TNF-a蛋白的表达。<br>　　3.提取新鲜心肌组织中的mRNA,利用实时定量PCR检测各组心肌中Cx45、Cx40以及TNF-amRNA的表达情况。<br>　　4.采用SPSS13.0统计软件分析Cx45、Cx40及TNF-a三者的表达情况及其相关性。<br>　　结果：<br>　　1.Cx45在三组心肌中的表达<br>　　Cx45在三组心肌组织中表达均为阳性表达。正常心肌组、早期心肌缺血猝死组、晚期心肌梗死猝死组中阳性表达率分别为80％、90％、96.7％。两个猝死组Cx45表达高于正常心肌组,与正常心肌组比较存在显著差异,有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　2.Cx40在三组心肌中的表达<br>　　Cx40在三组心肌组织中表达均为阳性。正常心肌组、早期心肌缺血猝死组和晚期心肌梗死猝死组阳性表达率分别为85％、60％、20％。两个猝死组中Cx40的表达较正常心肌组明显减少,差异显著,有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　3.TNF-a在三组心肌中的表达<br>　　TNF-a在早期心肌缺血猝死组及晚期心肌梗死猝死组中呈高表达,阳性表达率分别为63.3％、83.3％,且晚期心肌梗死猝死组比早期心肌缺血猝死组表达更多,而正常心肌组中表达阳性率仅15.0％,与两个猝死组比较存在显著差异(P＜0.05)。<br>　　4.Cx45、Cx40、TNF-a三者mRNA在三组心肌中的表达<br>　　qRT-PCR结果显示:Cx45蛋白、Cx40蛋白及TNF-a三者的mRNA表达与各自蛋白本身表达相一致,在正常心肌组、早期心肌缺血猝死组和晚期心肌梗死猝死组中表达存在显著差异,差异性有统计学意义(P＜0.01)。<br>　　5.Cx45、Cx40、TNF-a在三组心肌中相关性分析<br>　　经统计学分析发现:在早期心肌缺血猝死组和晚期心肌梗死猝死组中,Cx45和TNF-a及两者mRNA表达增加,呈正相关,相关系数R=3.133,P＜0.01。Cx45和Cx40及两者mRNA表达呈负相关,相关系数R=-1.453,P＜0.01。<br>　　结论：<br>　　1、Cx45及其mRNA在早期心肌缺血猝死组及晚期心肌梗死猝死组心肌细胞胞浆中表达水平高于正常心肌组,这将有可能作为心源性猝死诊断的辅助指标。<br>　　2、Cx40及其mRNA在两个猝死组心肌组织中表达低于正常心肌组,也可以作为法医学诊断心源性猝死的指标之一。<br>　　3、TNF-a及其mRNA在早期心肌缺血猝死组和晚期心肌梗死猝死组的表达显著高于正常心肌组,且晚期心肌梗死猝死组比早期心肌缺血猝死组表达更多,三组中的表达差异,有可能有利于心源性猝死的诊断,且有可能根据猝死者心肌组织中TNF-a的表达量的多少,对心肌缺血的严重程度及梗死面积的大小作出推断。<br>　　4、在早期心肌缺血猝死及晚期心肌梗死猝死心肌组织中,Cx45、TNF-a表达上调,Cx40表达下调,三者的相关性,将可能为心源性猝死的死因诊断提供更准确、更有利的依据。