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摘要目的:<br>　　慢性牙周炎是发生于牙周支持组织的慢性感染性疾病，被认为是人类最常见的慢性感染性疾病之一，可造成牙槽骨吸收、附着丧失和牙周袋形成，最终导致牙齿松动脱落，是成年人牙齿缺失的最主要原因。目前，慢性牙周炎治疗主要包括基础治疗和手术治疗，然而，迄今为止，还没有一种方法能完全实现丧失的牙周组织的修复再生。随着近年来牙周组织工程的深入研究，使得牙周组织的修复再生成为可能。人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells，hPDLCs）作为牙周膜中的主要功能细胞，能向成骨细胞、成牙骨质细胞等分化，形成矿化组织等，在牙周支持组织的修复再生中发挥着重要作用，是牙周组织工程首选的种子细胞之一。如何促进hPDLCs的骨向分化是实现牙周炎患牙牙周组织修复再生的关键之一。黄芩素（5，6，7-三羟基黄酮，baicalein）是从黄芩的干燥根中提取的一种黄酮类化合物。有文献报道黄芩素能促进小鼠成骨细胞株MC3T3-E1的成骨分化，抑制破骨细胞分化，并诱导其凋亡。最近的一项研究也表明黄芩素和汉黄芩素影响hPDLCs的增殖和基质钙化。研究黄芩素对hPDLCs骨向分化的作用和分子机制对于治疗牙周炎、实现牙槽骨再生有着重要意义。但有关黄芩素对hPDLCs骨向分化作用的分子机制尚未阐明清楚。为此，本研究以hPDLCs为研究对象，研究黄芩素对于其成骨分化潜能的影响，并深入探讨Wnt/β-catenin在黄芩素影响hPDLCs骨向分化中的调控机制，旨在为今后黄芩素应用于牙周组织再生提供实验依据和理论基础。<br>　　方法:<br>　　1.收集临床上因阻生原因拔除的第三磨牙，酶消化结合组织块法培养hPDLCs，并通过抗波形蛋白和抗角蛋白免疫细胞化学染色鉴定细胞来源。<br>　　2.分别用1.25μM、2.5μM、5μM和10μM浓度的黄芩素作用于hPDLCs，分组如下:空白组，1.25μM黄芩素组，2.5μM黄芩素组，5μM黄芩素组和10μM黄芩素组。通过MTT法检测黄芩素对hPDLCs增殖的影响，ALP活性检测、茜素红染色、qRT-PCR和Western blotting等方法研究黄芩素对hPDLCs骨向分化能力的影响，并筛选出最佳浓度。<br>　　3.加入100 ng/ml的Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK-1。分组如下:空白对照组，DKK-1组，10μM黄芩素组，DKK-1+10μM黄芩素组。再通过ALP活性检测、茜素红染色、qRT-PCR和Western blotting方法研究Wnt/β-catenin信号通路在黄芩素促进hPDLCs骨向分化中的分子调控机制。<br>　　结果:<br>　　1.酶消化结合组织块法成功培养出hPDLCs，免疫细胞化学染色鉴定结果表明抗波形蛋白阳性，抗角蛋白阴性，符合hPDLCs的中胚层来源特征。<br>　　2.1.25～10μM黄芩素作用于hPDLCs，相较于空白组，其增殖活力略下降，但差异无统计学意义(P＞0.05)。黄芩素组ALP活性上升和矿化结节形成增加(P＜0.05)，呈浓度依赖性。黄芩素组成骨相关基因RUNX2，BMP2，OSX和OCN的mRNA表达水平在3d时上升不明显，但随作用时间增长，表达量持续上升，11d上升最为显著(P＜0.05)，且10μM黄芩素组显著高于其余浓度组(P＜0.05)。3.与空白组相比，5μM和10μM浓度黄芩素明显上调了Wnt/β-catenin相关因子β-catenin，LEF1和Cyclin D1的蛋白表达，及靶基因Cyclin D1 mRNA表达(P＜0.05)。加入DKK-1后，hPDLCs内的β-catenin，LEF1和Cyclin D1的蛋白表达显著下降，Cyclin D1 mRNA水平也被下调(P＜0.05)。加入DKK-1后，黄芩素组hPDLCs的ALP活性和矿化结节形成被抑制(P＜0.05)，成骨相关基因RUNX2，BMP2，OSX和OCN mRNA表达亦呈现下调趋势(P＜0.05)。<br>　　结论:<br>　　1.黄芩素对hPDLCs的增殖活力无明显影响。黄芩素能促进hPDLCs的ALP活性、矿化结节形成，并上调成骨相关基因RUNX2，BMP2，OSX和OCN mRNA水平的表达，提示黄芩素对hPDLCs骨向分化具有促进作用。<br>　　2.黄芩素可上调hPDLCs的Wnt/β-catenin信号通路相关分子β-catenin， LEF1和Cyclin D1的表达。DKK-1明显阻断黄芩素作用下上调的β-catenin， LEF1和Cyclin D1的表达，同时还抑制黄芩素所促进的hPDLCs的ALP活性、矿化结节和成骨相关基因RUNX2，BMP2，OSX和OCN mRNA的表达上调，表明Wnt/β-catenin参与黄芩素促进hPDLCs骨向分化的调控过程。