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摘要黑色素瘤是人类常见的恶性肿瘤之一，其具有恶性程度高、死亡率高、易转移、发展迅速及预后差等特点。近几年来，其发病率和死亡率一直呈现上升趋势，但常规的治疗方法已不能取得理想的效果。研究表明，灭活仙台病毒(Hemaglutinating virus of JapanEnvelope，HVJ-E)可以诱发肿瘤细胞凋亡，但其作用机制尚未完全阐明。本文以小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)为对象，研究活性氧(reactive oxygen species，ROS)在HVJ-E致B16F10细胞凋亡中的作用机制，为揭示仙台病毒的抗肿瘤机制提供新的借鉴。<br>　　首先，我们用不同浓度的HVJ-E处理B16F10细胞，通过FACS（探针DCFH-DA）检测细胞中活性氧的产生水平、倒置显微镜观察细胞形态、CCK-8法测定细胞活力、FACS(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡、Hoechst33258荧光染色法观察细胞核形态变化。结果显示，HVJ-E能够引起B16F10细胞中ROS水平的增加，同时HVJ-E能引起B16F10细胞形态学以及核形态发生变化、细胞活力下降、凋亡率上升，并且呈剂量-效应关系。提示ROS可能参与了HVJ-E致B16F10细胞凋亡的过程。<br>　　然后，我们用不同浓度的HVJ-E处理B16F10细胞，通过Western blotting方法检测B16F10细胞中p53、Caspase、MAPK信号通路中凋亡相关蛋白的表达。结果表明，随着病毒浓度的增加，p53、Bax、Cleaved Caspase-3、PARP蛋白表达逐渐增强，Bcl-2蛋白表达逐渐减弱;MAPK信号通路中JNK、Erk1/2、p38蛋白磷酸化水平均逐渐增强。由此可以说明，p53、Caspase、MAPK信号通路可能参与了HVJ-E引起的B16F10细胞凋亡。<br>　　我们以活性氧清除剂(NAC)来分析ROS在HVJ-E致B16F10细胞凋亡中的作用。以NAC预处理B16F10细胞30 min后，加入HVJ-E作用24 h。再经CCK-8法检测细胞活力、FACS检测细胞凋亡率以及活性氧的产生水平、Western blotting方法检测凋亡相关蛋白的表达。结果表明，NAC预处理能够抑制HVJ-E引起的细胞活力的下降、能够抑制HVJ-E致B16F10细胞凋亡率、能够抑制细胞活性氧水平的增加;同时，NAC预处理也能够抑制HVJ-E引起的细胞中p53、Bax、Cleaved Caspase-3、PARP蛋白表达的增加以及Bcl-2蛋白表达的下降;MAPK信号通路中，JNK、Erk1/2、p38蛋白在NAC预处理后磷酸化水平也有所下降。这些均说明，ROS的确参与了HVJ-E致B16F10细胞凋亡的过程，且应该是在信号通路的上游发挥调控作用。<br>　　最后，我们通过建立小鼠黑色素瘤模型来分析HVJ-E的溶瘤效应及ROS的作用。BALB/c小鼠接种肿瘤细胞至直径约为0.5 cm时，瘤内分别注射PBS、HVJ-E、NAC和NAC+HVJ-E，每隔两天测量一次肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线，结果表明，与PBS组相比，HVJ-E组的肿瘤体积生长缓慢，而NAC+HVJ-E组与HVJ-E组相比生长较快，说明NAC能够抑制HVJ-E引起的肿瘤体积生长速度的下降。提取肿瘤组织蛋白并通过Westernblotting方法检测，结果表明，NAC能够抑制HVJ-E引起的小鼠黑色素瘤中p53、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达的增加以及Bcl-2蛋白表达的下降;同时在MAPK信号通路中，JNK、Erk1/2、p38蛋白的磷酸化水平也有所下降。这些能够说明，体内方面与体外方面研究的结果是相一致的，进一步验证了ROS在HVJ-E致B16F10细胞凋亡中的作用。