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摘要先天性巨结肠症（Hirschsprung Disease）又称为肠无神经节细胞症，在消化道的先天性畸形中，发生率仅次于直肠肛门畸形，有家族性发病倾向。该疾病主要以病变肠段神经节细胞缺失，处于痉挛狭窄状态，丧失蠕动和排便等功能，致使肠管蓄便、积气，而继发扩张、肥厚。在先前的研究中，通过ENU诱变手段，本实验室获得一例隐性遗传的巨结肠症小鼠，利用乙酰胆碱酯酶染色法及肠管组织HE染色法发现异常肠管段神经节细胞缺失。通过突变基因定位及鉴定发现内皮素受体B基因（Ednrb）编码区第857位碱基出现T到C的转换，导致第286位亮氨酸被脯氨酸替代（该小鼠被命名为Ednrbmly=cm）。对C57BL/6J(B6)互交获得的B6纯合子观察中，我们发现在B6背景中各纯合子小鼠巨结肠症严重程度相似。对[C57BL/6J(B6)×DBA/2J(D2)]F1互交获得的F2突变纯合子观察发现小鼠巨结肠症严重程度不一且无性别差异，提示存在修饰基因的影响。本研究以上述突变系小鼠为对象，从以下3个部分开展:<br>　　1.微卫星标记筛选<br>　　利用MGI多态标记数据库(http://www.informatics.j ax.org/)，在小鼠的19对常染色体上，选择遗传距离平均在15cM（厘摩）左右，B6及D2之间碱基差异尽量在10bp以上的微卫星标记110个，进行微卫星条件摸索。结果发现其中82个微卫星标记可用于后续QTL定位。<br>　　2.QTL初步定位<br>　　PCR酶切法确定F2代纯合子巨结肠症幼鼠93例，纯合子F2代小鼠出生5-10天内取小鼠的整段肠（十二指肠到直肠末段）组织进行乙酰酯酶染色，以神经节缺失肠段长度与整段肠长度的比值作为表型值。采用基因组扫描法，对F2代93例小鼠DNA样品分别用82对微卫星引物进行初步的QTL分析。结果显示在11号染色体和15号染色体上存在2个位点阈值超过0.630，LOD值都超过了2.52，提示11号及15号染色体上存在影响巨结肠症表型的QTL位点，位于微卫星D11Mit41位点和D15Mit265位点附近。<br>　　3.部分QTL精确定位<br>　　增加F2代纯合子巨结肠症幼鼠数量至152例，对11号染色体和15号染色体进行QTL精确定位。结果显示，QTL与D11Mit41位点附近处LOD值为5.36，与D11Mit338位点附近处LOD值为3.83，与D11Mit226位点附近处LOD值为1.95，与D15Mit265附近处LOD值为4.92。单基因QTL线性回归分析统计结果显示位点D11Mit226、D11Mit338和D11Mit41附近F2代纯合子小鼠中基因型为BB型的巨结肠症较为严重，而BD基因型时巨结肠症严重程度明显减轻，DD型严重程度最轻，说明在B6背景巨结肠症小鼠中引入11号染色体上DBA部分基因片段后巨结肠症严重程度明显减轻，提示11号染色体上DBA背景中存在有减轻巨结肠症严重程度的修饰基因。在D15Mit265位点附近基因型BB和DD型巨结肠症比较严重，而在BD基因型时巨结肠症严重程度明显减轻，提示15号染色体上存在有相关的调控基因的可能性。