摘要目的:研究中药单体金丝桃苷、淫羊藿苷是否促进大鼠卵巢颗粒细胞增殖并促进其分泌孕酮和雌二醇,同时,研究金丝桃苷、淫羊藿苷对颗粒细胞中雌二醇、孕酮合成的关键酶基因CYP17、CYP19的调控,以期阐明金丝桃苷、淫羊藿苷调控大鼠卵巢颗粒细胞功能的机制。<br> 方法:分离大鼠卵巢颗粒细胞,体外培养24h后于培养基中加入不同浓度的金丝桃苷、淫羊藿苷,继续培养72h,通过MTT法检测实验组及对照组卵巢颗粒细胞增殖率,绘制大鼠卵巢颗粒细胞生长曲线;酶联免疫吸附测定法检测各组颗粒细胞培养液中的雌二醇、孕酮浓度,荧光实时定量PCR法检测各组卵巢颗粒细胞CYP17、CYP19基因mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法检测各组CYP17、CYP19蛋白的表达。<br> 结果:一定浓度的金丝桃苷、淫羊藿苷可明显增加卵巢颗粒细胞数量(P<0.05),并促进其雌二醇、孕酮的分泌(P<0.05),同时促进CYP17、CYP19基因mRNA的表达(P<0.05)。50ug/L为金丝桃苷促进CYP17(P<0.01)、CYP19(P<0.01)表达的最佳浓度;10ug/L为淫羊藿苷促进CYP17(P<0.05)、CYP19(P<0.01)表达的最佳浓度。蛋白免疫印迹法的结果与mRNA相一致。<br> 结论:一定浓度的金丝桃苷、淫羊藿苷能够促进体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞增殖,并促进卵巢颗粒细胞分泌雌二醇及孕酮,同时促进CYP17、CYP19 mRNA及的蛋白表达,说明金丝桃苷、淫羊藿苷促进颗粒细胞增殖,并促进CYP17、CYP19基因表达,从而促进颗粒细胞分泌雌二醇和孕酮,提示金丝桃苷、淫羊藿苷可能在因颗粒细胞功能不全而不孕的患者中有应用前景。
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