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二仙汤对卵巢切除大鼠胰岛素敏感性的影响及其机制的研究

摘要目的:<br>  更年期后女性生理、心理等方面的变化,使体内脂肪分布发生异常,其中以积聚在腰腹部为主,这种以腰腹部为中心的肥胖,被称为更年期女性“向心性肥胖”。更年期女性向心性肥胖已严重危害到更年期女性的身体健康。已有研究表明:它是导致更年期女性2型糖尿病发生的重要原因之一。中医认为更年期后女性向心性肥胖的主要病机是以肾阴阳两虚为主,湿阻为辅。故此选用了具有温补肾阳、滋补肾阴,兼能祛湿的二仙汤。西医认为,导致更年期女性向心肥胖发生的主要因素是雌激素分泌减少。因此西医选择了雌激素替代疗法来防治更年期女性肥胖,但是长期使用可能会增加更年期后女性患乳腺癌等疾病的机率。关于中医选择的二仙汤方是否能防治更年期女性向心性肥胖及预防更年期女性向心性肥胖引起的2型糖尿病呢?本实验基于以上问题来探讨二仙汤对卵巢切除大鼠胰岛素敏感性的影响及其机制。<br>  方法:<br>  1.整体水平观察二仙汤对卵巢切除大鼠胰岛素敏感性的影响。<br>  40只雌性SD大鼠,卵巢切除术后第7天,随机分组,每组8只,共分五组,分别是假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、二仙汤低剂量组(EXDL,30mg/kg)、二仙汤高剂量组(EXDH,60mg/kg)、雌激素组(E2,0.01mg/kg)。假手术组和模型组给予等量生理盐水,每天灌胃一次。连续治疗14周后,CT检测各组大鼠腹腔内脂肪及皮下脂肪的相对含量,检测空腹血糖、血清胰岛素水平、糖耐量,并计算各组大鼠的胰岛素抵抗指数;应用qPCR技术,检测各组大鼠腹腔内脂肪中的MCP-1、Adiponectin的mRNA相对水平。<br>  2.细胞水平探讨二仙汤影响卵巢切除大鼠胰岛素敏感性的可能机制。<br>  制备二仙汤含药血清,取15只雌性SD大鼠,随机分为3组,每组5只,分别是对照组(等量生理盐水)、二仙汤低剂量组(30mg/kg)、二仙汤高剂量组(60mg/kg)。每天灌胃一次。连续2周后,断头取血,室温静置2h,1300rpm,4℃,离心10min。给予已分化成熟的3T3-L1脂肪细胞缺氧0h、4h、12h、24h。应用ELISA法检测细胞上清液中MCP-1的水平,确定缺氧时间点。随机分三组:缺氧对照血清干预组(HCSI)、缺氧二仙汤低剂量含药血清干预组(HEXDLSI)、缺氧二仙汤高剂量含药血清干预组(HEXDHSI)。缺氧前二仙汤含药血清预先作用2h,缺氧12h后。应用ELISA法检测各组细胞上清液中MCP-1的含量。<br>  结果:<br>  整体水平实验结果:二仙汤可降低卵巢切除大鼠腹腔内脂肪含量,降低胰岛素抵抗指数并提高糖耐量,qPCR检测显示二仙汤可下调卵巢切除大鼠腹腔内脂肪中MCP-1的mRNA水平、上调Adiponectin的mRNA水平。<br>  细胞水平实验结果:3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,体外缺氧0h、4h、12h、24h并ELISA检测各时间段细胞上清液中MCP-1的浓度结果显示:缺氧的最佳时间点是:12h。ELISA检测二仙汤含药血清预干预2h,缺氧处理12h后,各组细胞上清液中的MCP-1水平结果显示:低、高剂量二仙汤含药血清预干预后缺氧诱导3T3-L1脂肪细胞分泌MCP-1的水平与对照组血清预干预后相比无统计学差异。<br>  结论:<br>  二仙汤可改善卵巢切除大鼠胰岛素敏感性,这可能与其改善腹腔内脂肪内分泌功能有关。缺氧可诱导3T3-L1脂肪细胞分泌MCP-1,二仙汤含药血清干预后并不能显著下调缺氧诱导3T3-L1脂肪细胞分泌MCP-1。

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