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基于等离激元纳米结构的酶联免疫吸附测定

摘要酶联免疫吸附测定(ELISA)是生物大分子定量的主要方法。近些年,随着纳米颗粒模拟酶的迅速发展,利用纳米颗粒取代传统ELISA中起信号放大作用的天然酶(如辣根过氧化物酶)的新型ELISA模式不断涌现,展示了其广阔的应用前景。金纳米棒@铂铜合金(AuNR@PtCu)表现出类过氧化物酶活性,可以催化氧化常见的过氧化酶底物(TMB,OPD,ABTS等)。将探测抗体修饰的AuNR@PtCu用于传统ELISA,论文实现了人源免疫球蛋白(IgG)纳克量级的探测。在此基础上,论文进一步发展了基于等离激元纳米结构作为显色剂的ELISA。球形银纳米晶在400纳米处显示出强的局域表面等离激元共振,其溶胶呈亮黄色。以银纳米晶作为显色底物,论文展示了另外两种基于等离激元纳米结构的ELISA和一种非酶放大等离激元免疫吸附测定方法。策略一为抗坏血酸氧化酶调控的银生长。抗坏血酸还原银离子形成银纳米晶,后者等离激元消光强度可作为探测信号。利用探测抗体修饰的抗坏血酸氧化酶消耗抗坏血酸来调控银纳米晶的生长,可实现抗原探测。抗原越多,消耗的还原剂越多,银纳米颗粒的消光强度越低。抗原含量的对数坐标与银纳米晶消光强度成线性相关。以模型蛋白human IgG为例,实现了阿克量级探测,探测范围为2.5x10-9~100 ng/100μl。策略二则借助纳米颗粒模拟酶调控的银生长。金种@铂铜合金纳米颗粒(Au seed@PtCu)表现出类抗坏血酸氧化酶活性,因此探测抗体修饰的Au seed@PtCu也可借助策略一实现抗原探测。研究表明,探测限可达阿克量级,探测范围也在2.5x10-9~100 ng/100μl之间,但分辨率远好于基于抗坏血酸氧化酶的ELISA。非酶放大的等离激元免疫吸附测定方法则是一种全新的探测模式。探测抗体修饰的金球(10纳米)可造成自成核生长的银与再生长银之间的有效竞争,并对自成核银纳米晶的生长动力学产生影响。在合适的生长动力学窗口,可以实现对human IgG的灵敏探测,探测限为1pg/100μl,探测范围10pg~50000pg/100μl。论文集中在如何通过优化催化活性和生长条件实现高灵敏和宽动态范围的可靠探测。<br>  论文分成六部分。第一部分介绍了与纳米颗粒相关的ELISA的研究进展及本论文的目的和策略。第二部分涉及作为显色剂的银纳米颗粒的优化制备\抗体连接和ELISA探测。第三部分是各种plasmonic ELISA探测方法的设计和构建。第四部分是非酶放大的等离激元免疫吸附测定方法设计和构建。第四部分是对各种plasmonic ELISA策略的比较与讨论。第六部分是结论和展望。

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