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摘要本文主要从以下几个部分展开论述：<br>　　第一部分：GOLPH3、NDRG1在胶质瘤中的表达及相关性的研究<br>　　目的：<br>　　高尔基体磷蛋白3 (GOLPH3:Golgi phosphoprotein 3)被认为是外壳蛋白(coat proteins)的一种，NDRG1(N-myc downstream regulated gene 1)于1997年第一次被分离，在人体正常组织及肿瘤中均存在表达，且同时也被发现参与了胚胎发生发育、细胞生长分化、脂质合成、髓鞘形成、应激反应和免疫功能等多个过程。本实验研究GOLPH3、NDRG1分别在正常脑组织和人脑胶质瘤组织不同病理级别中的表达，并对其表达情况与胶质瘤病理级别的关系进行研究。<br>　　方法：<br>　　本实验分为正常脑组织组、胶质瘤Ⅱ级组、Ⅲ级组和Ⅳ级组，正常脑组织来自于脑外伤患者需要行颅内减压手术而取得的非坏死的正常脑组织标本。应用Real-time RT-PCR法和Western Blot法检测34例人脑胶质瘤标本和9例正常脑组织中的GOLPH3和NDRG1的mRNA和蛋白水平，并进行统计学分析;应用免疫组织化学方法检测9例正常脑组织标本和76例人脑胶质瘤组织标本中的GOLPH3和NDRG1表达情况，并分析两种基因表达的相关性。<br>　　结果：<br>　　1.在人脑胶质瘤组织和正常脑组织中，GOLPH3和NDRG1在mRNA水平和蛋白水平均有表达。在人脑胶质瘤中，GOLPH3的mRNA和蛋白的表达水平均高于正常脑组织，且与正常脑组织中的表达差异有统计学意义(P＜0.05)，并随着胶质瘤的病理级别的增高而增加。而NDRG1的mRNA和蛋白表达量在正常脑组织中表达较低，在人脑胶质瘤Ⅱ级组中最高，差异有统计学意义(P＜0.01)，在胶质瘤组织中，随着病理级别的升高，NDRG1的mRNA和蛋白表达水平逐渐降低。NDRG1的mRNA和蛋白在正常脑组织组和Ⅲ级组、Ⅳ级组中的表达无明显统计学意义(P＞0.05)。在胶质瘤组织中，GOLPH3和NDRG1在mRNA水平和蛋白水平的表达趋势相反。<br>　　2.GOLPH3的免疫组化结果显示，GOLPH3的阳性表达主要位于细胞内细胞核旁，相当于高尔基体位置，呈粗大颗粒状，部分染色为细小颗粒状，着色弥散存在于细胞质中。GOLPH3在正常脑组织组和胶质瘤组中的阳性表达率分别为22.2％(2/9)、57.9％(44/76)，两者比较(x=4.124，P＜0.05);Ⅱ级组39.1％(9/23)，Ⅲ级组54.2％(13/24)，Ⅳ级组75.9％(20/29)。这说明GOLPH3蛋白表达阳性率在胶质瘤组织中高于正常脑组织，且随病理级别增高而升高。<br>　　NDRG1的免疫组化结果显示，NDRG1的阳性表达主要位于细胞的细胞质，也有部分表达在细胞膜或细胞的连接部位。NDRG1在正常脑组织组和胶质瘤组中的阳性表达率分别为44.4％(4/9)、46.1％(35/76)，两者比较(x=0.008，P＞0.05);Ⅱ级组60.9％(14/23)，Ⅲ级组，41.7％(10/24)，Ⅳ级组20.6％(7/29)。在脑胶质瘤组织中，NDRG1蛋白表达阳性率随病理级别增高呈降低的趋势。<br>　　NDRG1和GOLPH3的免疫组化阳性率情况和Western-Blot检测的蛋白表达趋势是一致的。<br>　　结论：<br>　　1、GOLPH3和NDRG1在正常脑组织和胶质瘤组织中均有表达。在胶质瘤组织中，GOLPH3的表达随着肿瘤组织病理级别的升高逐渐升高，而NDRG1的表达随着肿瘤组织病理级别的升高逐渐减低。<br>　　2、GOLPH3和NDRG1在胶质瘤中的表达呈负相关。<br>　　第二部分：GOLPH3和NDRG1对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及相关机制的研究<br>　　目的：<br>　　探讨GOLPH3和NDRG1对胶质瘤细胞凋亡、增殖的影响及两者之间的关系、可能机制，为胶质瘤治疗提供潜在的基因治疗分子靶点。<br>　　方法：<br>　　1.在胶质瘤细胞U251及U87中，用lipofectamine2000转染GOLPH3或NDRG1的siRNA，用Polyjet转染GOLPH3或NDRG1的过表达质粒。<br>　　2.运用Westem Blot检测其蛋白表达水平;流式细胞术检测GOLPH3 siRNA、NDRG1siRNA、GOLPH3过表达质粒及NDRG1过表达质粒对U87、U251细胞凋亡的影响;CCK-8法检测细胞增殖情况。<br>　　结果：<br>　　1.下调GOLPH3或过表达NDRG1后，胶质瘤U251、U87细胞的凋亡增多，增殖能力下降，过表达GOLPH3或下调NDRG1后，胶质瘤U251、U87细胞的凋亡减少，增殖能力升高。<br>　　2.在胶质瘤U251细胞系中下调GOLPH3后，NDRG1、cleaved-caspase3的蛋白表达水平明显增加，过表达GOLPH3后，NDRG1、cleaved-caspase3的蛋白表达水平明显减少。<br>　　3.在胶质瘤U251细胞系中下调NDRG1，GOLPH3的蛋白表达水平变化无统计学意义，cleaved-caspase3的蛋白表达水平减少。<br>　　结论：<br>　　1.下调GOLPH3或过表达NDRG1促进细胞的凋亡，减少增殖，而过表达GOLPH3或下调NDRG1则减少细胞的凋亡，促进增殖。GOLPH3和NDRG1均和胶质瘤细胞的凋亡，增殖有关，有可能成为胶质瘤治疗的新靶点。<br>　　2.GOLPH3可能位于NDRG1的上游，干扰GOLPH3可通过上调NDRG1并增加cleaved-caspase3的表达来促进胶质瘤细胞的凋亡。