检索历史 清除

摘要髓鞘是保护、营养和支持轴突的膜性结构，在遗传和/或环境等因素的作用下，髓鞘损伤，轴突裸露，从而引起脱髓鞘疾病。脱髓鞘疾病复发率和病残率较高，疾病多呈进行性进展，但髓鞘的脱失和再生机制不明确。鉴于人体研究困难，存在很大的局限性，利用动物模型进行研究显得尤为重要。斑马鱼的髓鞘结构、少突胶质细胞的分化过程与哺乳动物相似，基因操作技术成熟，是研究髓鞘损伤和形成的理想模式动物。前期构建的转基因斑马鱼Tg(mbp:nfsB-egfp)不仅可以利用绿色荧光蛋白追踪髓鞘的发育形成，还可以通过甲硝唑来特异性清除少突胶质细胞。本文利用转基因斑马鱼Tg(mbp:nfsB-egfp)对IL7R在髓鞘损伤的作用机制进行研究。首先，在成体Tg(mbp:nfsB-egfp)诱导髓鞘脱失，在形态学观察基础上利用磁共振成像技术(MRI)完成了成鱼脊髓髓鞘的扫描，发现髓鞘脱失处组织出现水肿等早期炎性改变。第二，利用表达谱芯片筛选幼鱼髓鞘损伤的差异基因，发现白介素-7受体（interleukin7 receptor，il7r）显著下调，JAK/STAT途径的磷酸化蛋白基因表达降低，而细胞凋亡相关基因表达增强。第三，以寡肽核苷酸抑制胚胎中的il7r翻译导致髓鞘形成延迟。上述实验证明，il7r是调控髓鞘脱失和髓鞘形成的关键分子，il7r的缺乏促进髓鞘脱失，并延迟髓鞘形成。<br>　　本文还对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha，TNFα)在视网膜神经细胞分化和髓鞘形成中的作用进行了研究。以显微注射寡肽核苷酸的方法特异性抑制tnfα的翻译，再通过原位杂交、免疫组化、酶联免疫吸附试验和q-PCR等方法研究神经细胞的分化和神经系统髓鞘形成。靶向敲低tnfα后，视网膜神经细胞按时启动分化，节细胞、视锥细胞和视杆细胞等三种视网膜主要神经细胞的发育并未受到明显干扰，并且，中枢神经系统和周围神经系统的髓鞘形成符合其生理情况。因此，TNFα在斑马鱼视网膜神经细胞发育和髓鞘形成中不是必不可少的调控因子。