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摘要目的：<br>　　免疫系统是机体重要的一大系统，免疫功能低下或亢进均可引起疾病的发生。环磷酰胺为细胞毒性化疗药物，常采用腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制模型。灵猫方为我科治疗慢性乙型肝炎的经验效方，其单味组成中药具有免疫调节作用，拟进行单味药与组方之间的对比研究。本研究以灵猫方及其单味组成中药对免疫抑制小鼠免疫功能的影响为出发点，探讨灵猫方对免疫抑制小鼠的免疫调节功能，为灵猫方的临床应用提供更多的现代理论依据。<br>　　方法：<br>　　1.动物分组和造模方法:96只雄性小鼠根据完全随机分组原则，分为正常组、模型组、黄芪组、猫爪草组、仙灵脾组、灵猫方组，每组16只小鼠。按80mg/kg/d剂量腹腔注射环磷酰胺，每天一次，连续注射三天，构建环磷酰胺所致免疫抑制小鼠模型。2.给药方法:正常组小鼠予以等量生理盐水腹腔注射。第4天至第18天各组予以对应中药灌胃，每天一次。正常组予以等量生理盐水灌胃。3.取材及检测方法:灌胃结束后，取胸腺、脾脏及肝脏，计算各脏器指数;取外周血检测IgA、IgG、IgM水平。取小鼠脾淋巴细胞，加入4μg/ml LPS或5μg/ml ConA培养48小时，取细胞培养上清检测各组IL-2、IL-4、IL-12、TNF-α、IFN-γ等细胞因子水平;MTT法检测各组小鼠脾淋巴细胞增殖水平。LDH法检测各组小鼠脾淋巴细胞杀伤活性。PCR检测各组小鼠肝脏及脾脏组织中T-bet及GATA3mRNA的表达及T-bet/GATA3比值变化。4.体外实验:取小鼠脾淋巴细胞，加入低中高剂量的灵猫方粗提物，培养48小时后，取细胞培养上清检测IL-2水平;MTT法检测各组之间脾淋巴细胞增殖水平。加入aTLR2/aTLR4抗体预处理小鼠脾淋巴细胞后加入灵猫方含药培养液，培养48小时后取细胞培养上清，检测IL-2水平;MTT法检测各组之间脾淋巴细胞增殖水平。<br>　　结果：<br>　　1.模型组小鼠胸腺组织发生明显的脂肪变性，各治疗组小鼠胸腺组织脂肪变性发生不同程度的改善。与模型组对比，黄芪组和灵猫方组的胸腺指数增加(p＜0.05、p＜0.001);黄芪组、仙灵脾组、猫爪草组、灵猫方组脾脏指数增加（均为p＜0.001）;<br>　　2.仙灵脾组与灵猫方组可提高免疫抑制小鼠外周血IgA水平(p＜0.001、p＜0.001)，黄芪组与灵猫方组提高免疫抑制小鼠外周血IgM水平(p＜0.05、p＜0.001);<br>　　3.小鼠脾淋巴细胞培养上清细胞因子含量变化:3.1未刺激时，与模型组比较，仙灵脾、猫爪草组、灵猫方组脾淋巴细胞培养上清IL-2含量增加(p＜0.001);黄芪组、仙灵脾组、猫爪草组及灵猫方组脾淋巴细胞培养上清IL-4含量增加(p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001、p＜0.05);仙灵脾组及灵猫方组脾淋巴细胞培养上清IL--12含量增加(p＜0.05、p＜0.001);仙灵脾组、猫爪草组及灵猫方组脾淋巴细胞培养上清IFN-γ含量增加(p＜0.01、p＜0.001、p＜0.001)。仙灵脾组、猫爪草组及灵猫方组脾淋巴细胞培养上清TNF-α含量明显上升，差异有统计学意义（均为p＜0.001）;<br>　　3.24μ g/ml LPS刺激下，黄芪组与仙灵脾组培养上清IL-2含量增加(p＜0.001、p＜0.05)。黄芪组培养上清IL-4含量增加(p＜0.001);黄芪组、仙灵脾组、猫爪草组及灵猫方组脾淋巴细胞培养上清IL-12含量增加(p＜0.05、p＜0.01、p＜0.01、p＜0.01)。黄芪组、仙灵脾组、猫爪草组及灵猫方组脾淋巴细胞培养上清IFN-γ含量增加（均为p＜0.001）。各组脾淋巴细胞培养上清TNF-α增加(p＜0.05、p＜0.001、p＜0.001、p＜0.001);<br>　　3.35μ g/ml ConA刺激下，与模型组比较，灵猫方组脾淋巴细胞培养上清IL-2含量升高(p＜0.001)。黄芪组脾淋巴细胞培养上清IL-4含量增加(p＜0.05);仙灵脾组、猫爪草组及灵猫方组脾淋巴细胞培养上清IL-12含量增加(p＜0.01、p＜0.001、p＜0.001)。各组脾淋巴细胞培养上清IFN-γ含量增加（均为p＜0.001）。仙灵脾组、猫爪草组及灵猫方组脾淋巴细胞培养上清TNF-α含量增加(p＜0.001、p＜0.01、p＜0.001);<br>　　4.未刺激，LPS和ConA刺激时，与模型组比较，黄芪组、仙灵脾组、猫爪草组、灵猫方组的脾淋巴细胞增殖水平均较高，差异有统计学意义。与模型组比较，黄芪组、仙灵脾组、猫爪草组、灵猫方组小鼠的脾淋巴细胞杀伤活性均较高，差异有统计学意义(p＜0.05、p＜0.001、p＜0.001、p＜0.001);<br>　　5.各组小鼠肝脏T-bet mRNA表达水平无明显差异。与正常组比较，模型组肝脏组织GATA3 mRNA表达水平降低。与模型组比较，黄芪组、仙灵脾组、猫爪草组及灵猫方组GATA3 mRNA表达水平均增高，差异有统计学意义(p＜0.001、p＜0.05、 p＜0.05、p＜0.001);<br>　　6.与模型组比较，黄芪组、仙灵脾组、猫爪草组及灵猫方组脾组织T-bet mRNA表达均增高，差异有统计学意义(p＜0.001、p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001);各组脾组织GATA3 mRNA表达均增高，差异有统计学意义（均为p＜0.001);<br>　　7.低中高剂量粗提物体外刺激小鼠脾淋巴细胞，与空白组比较，低剂量组、中剂量组、高剂量组脾淋巴细胞培养上清IL-2含量较高(p＜0.01、p＜0.001、p＜0.001);中剂量组、高剂量组脾淋巴细胞增殖水平较高，差异有统计学意义(p＜0.01、p＜0.001)。aTLR2或aTLR4抗体预处理后，加入灵猫方含药培养液，小鼠脾淋巴细胞培养上清IL-2含量减低，差异有统计学意义（均为p＜0.001）。aTLR2组及aTLR4组与对照组比较，小鼠脾淋巴细胞增殖水平较低，差异有统计学意义(p＜0.05、p＜0.001);<br>　　结论：<br>　　1.80mg/kg/d腹腔注射环磷酰胺连续3天，可成功建立免疫抑制模型;2.灵猫方及其单味组成中药可单一或协同提高免疫抑制小鼠的胸腺指数及脾脏指数、细胞免疫及体液免疫功能;3.灵猫方粗提物体外可诱导小鼠脾淋巴细胞IL-2的分泌及其增殖，并呈剂量依赖效应。灵猫方粗提物通过TLR2和TLR4途径介导脾淋巴细胞分泌IL-2及其增殖。