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摘要黑色素的积累，不仅影响肤色，过量积累还会引起雀斑、褐斑等相关疾病，甚至诱发黑色素瘤。近年来黑色素瘤的发病率呈逐年上升趋势，它具有转移早、进展快、预后差、死亡率高的特点。<br>　　酪氨酸酶是黑色素形成的关键酶，因此以抑制酪氨酸酶活性为靶点的药物、功能性食品、化妆品的开发成为研究的重点。<br>　　本论文以酪氨酸酶为研究对象，首次建立了以多巴为底物的薄层色谱生物自显影酪氨酸酶抑制活性筛选方法，与现有文献的薄层生物自显影方法比较，减少了酶的用量，缩短了反应时间，提高了反应灵敏度。在此基础上，应用此方法对化合物、植物提取物进行了筛选，在活性筛选基础上，对具有较好酪氨酸酶抑制活性的圣地红景天进行了系统的化学成分研究，从中分离、纯化、鉴定了21个化合物，其中9个化合物具有较强的酪氨酸酶抑制活性，且细胞毒性较小。<br>　　1、薄层色谱生物自显影酪氨酸酶抑制剂筛选方法<br>　　首先，对薄层层析板的类型（反相薄层层析硅胶板、正相硅胶薄层层析板、和纤维素板），载体（铝和玻璃），厂家(Merck、MN和烟台黄海)，是否含荧光剂进行考察，结果表明Merck F254铝底硅胶薄层层析板是最适合的载体。其次考察薄层扫描参数，确定在荧光模式下，波长580 nm扫描;同时优化了反应条件，确定了最佳反应条件:反应温度(25℃)、酶浓度(75 U/mL)与底物浓度(3.5mM)及反应时间(15 min);最后对该方法进行了方法学考察，结果显示，该方法检测限为1ng，同板精密度、异板精密度、日间精密度和日内精密度的RSD均小于7.0％，重复性、准确度和耐用性的RSD小于4.0％。本实验运用该方法对部分活性化合物和提取物进行了酪氨酸酶抑制活性筛选，筛选结果与以多巴为底物的酪氨酸酶抑制剂分光光度筛选法和酪氨酸酶抑制剂B16小鼠黑色素瘤细胞筛选法得到的结果进行对比，用统计学软件SPSS分析实验结果，三种方法所得结果的相关性r2均大于0.9(提取物的r2=0.996，单体化合物的r2=0.989)，表明了该方法的可行性。<br>　　2、圣地红景天化学成分研究<br>　　通过前期活性筛选，圣地红景天乙醇提取物具有良好的抑制酪氨酸酶活性。应用薄层色谱生物自显影酪氨酸酶抑制剂筛选方法，对圣地红景天不同部分萃取物进行筛选，结果显示乙酸乙酯萃取部分为主要活性部位。根据活性筛选结果，通过传统柱色谱以及制备液相色谱等手段对乙酸乙酯萃取部分进行分离、纯化。从该部位共分离得到了21个化合物，包括7个黄酮类化合物以及7个苯丙素类化合物，2个苯乙醇类化合物，2个苯酚类化合物，2个单萜类化合物，1个其他类化合物。其中2个单萜类化合物为首次从该属植物中分离得到，其中一个单萜苷为首次给出波谱信息的化合物。我们用酪氨酸酶抑制剂B16小鼠黑色素瘤细胞筛选法进行活性筛选，9个化合物具有较好的酪氨酸酶抑制能力，且毒性较小，其中大花红景天素活性IC50为23.60±0.59μM接近阳性药曲酸，且没有细胞毒性。