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摘要目的:基于前期工作基础，发现扶正化瘀方这一抗肝纤维化有效中药复方的效应物质基础，并初步形成有效组分复方。本研究针对肝纤维化血管新生的病理特点，复制CC14肝纤维化模型，评价扶正化瘀组分复方对肝纤维化血管新生的疗效，进而通过体内、体外实验，围绕血管新生的关键环节——基膜重构、肝窦内皮细胞表型改变及VEGF信号通路探讨其作用机制。<br>　　方法:本论文分为二个部分<br>　　1、扶正化瘀组分复方抑制纤维化小鼠肝脏血管新生的疗效及作用机制。雄性C57BL/6小鼠80只，随机分为正常组、模型组、索拉非尼组、扶正化瘀组、扶正化瘀组分复方组。CCl4腹腔注射诱导小鼠肝纤维化模型，每周3次，共6周。自造模第4周开始给药，给药剂量为索拉非尼4mg/kg、扶正化瘀方4.8g/kg、扶正化瘀组分复方20μM/kg(注:组分复方中每个单体给药浓度均为20μM)，每天1次，共3周;正常组及模型组灌胃等体积生理盐水。实验结束后，观察小鼠一般情况，包括体重、脾体比、肝体比变化;试剂盒检测血清肝功能ALT、AST、Alb、AKP、TBil水平;HE染色观察肝组织炎症;天狼星红染色及盐酸水解法检测羟脯氨酸含量评价纤维化胶原沉积;同步辐射二维成像肝脏血管及CD31、vWF免疫荧光染色评价血管新生;免疫组化及蛋白印迹法检测肝组织α-SMA表达评价星状细胞活化情况;扫描电镜观察肝窦窗孔、明胶酶谱法检测MMP2/9活性，免疫组化法观察Ⅳ型胶原表达，蛋白印迹法检测VEGF信号通路蛋白变化。<br>　　2、扶正化瘀组分复方抑制肝纤维化血管新生的细胞分子作用机制。CCK8法检测扶正化瘀组分复方对HHSEC细胞活力的影响，确定其最大无毒浓度;以ECGs诱导HHSEC细胞增殖;以抑制血管新生的酪氨酸激酶抑制剂索拉非尼为阳性对照，各组药物分别孵育48h后，CCK8法检测药物对细胞活力的影响，EDU法检测细胞增殖，免疫荧光法检测细胞vWF的表达，荧光探针法检测胞内NO水平，蛋白印迹法检测细胞VEGF/AKT/eNOS信号通路蛋白表达，最后管腔生成实验评价其抑制血管新生作用。<br>　　结果:1、扶正化瘀组分复方抑制纤维化小鼠肝脏血管新生的疗效及作用机制:与正常组小鼠相比，模型组小鼠血清ALT、AST显著升高，肝体比、脾体比明显增加，肝组织炎性反应及胶原沉积明显，Hyp含量升高，肝叶微血管纹理增多、血管壁毛糙，肝组织CD31及vWF表达增加，α-SMA表达增加，肝脏窦状内皮窗孔闭合及数量减少，MMP2/9活性及Ⅳ胶原表达明显升高，肝组织p-ERK1/2表达显著增加;与模型组比较，扶正化瘀组分复方组小鼠肝体比显著降低，脾体比无明显变化，ALT、AST显著降低;Alb、AKP、TBil无明显改变，肝组织炎症及胶原沉积有不同程度的改善，Hpy含量明显降低，微血管数量明显减少，vWF及CD31表达明显降低，肝组织α-SMA表达明显降低，肝窦状内皮细胞窗孔数量明显增加，MMP2/9活性及Ⅳ胶原表达下降，肝组织VEGF、p-ERK1/2表达显著降低。<br>　　2、扶正化瘀组分复方抑制肝纤维化血管新生的细胞分子作用机制:扶正化瘀组分复方对HHSEC细胞毒性结果显示，药物在6.25μM以上出现明显的毒性作用;与空白对照组比较，ECGs诱导的HHSEC细胞出现明显增殖，vWF的表达及胞内NO水平显著升高，VEGF、p-AKT、eNOS蛋白表达明显增加;扶正化瘀组分复方处理后，细胞增殖、vWF表达、NO水平及VEGF、p-AKT、eNOS蛋白表达明显下降;组分复方组血管生成得到明显抑制。<br>　　结论:1、扶正化瘀方组分复方具有抑制纤维化小鼠肝脏血管新生的作用。<br>　　2、VEGF/AKT/eNOS信号通路扶正化瘀组分复方抗肝纤维化血管新生的主要作用机制。