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基于IB4阳性伤害性感受器探讨推拿手法镇痛效应机理的研究

摘要本文从以下几个部分展开论述:<br>  第一章 适合推拿镇痛研究的炎症性腰痛大鼠模型造模及验证<br>  目的:根据推拿临床疾病的特点,通过应用CFA注射的方法诱导以疼痛和功能障碍为病理表现的大鼠腰痛模型,为推拿镇痛的实验研究做前期准备。<br>  方法:将32只SD大鼠随机分为两组:完全弗氏佐剂组(CFA组),生理盐水组(NS组),两组动物分别16只。将实验大鼠放在测试环境中连续适应1个星期后,连续两天测量其左后足机械足反射阈值(PWT)、热缩足反射潜伏期(PWL)及Catwalk步态参数,取平均值作为造模前的基础数值,然后分别向CFA组大鼠和NS组大鼠左侧腰段2(L2)~腰5(L5)注射2ml CFA和NS,造模后两组中各随机选取8只动物,分别在造模后的第1天、3天、7天、10天、14天对2组动物的PWT、PWL及Catwalk步态参数进行测试;两组中各剩余的8只动物于造模后3天进行取材,用于SP物质含量检测及HE染色。<br>  结果:(1)机械足反射阈值(PWT)变化:CFA组与NS组相比较,注射侧PWT在造模后第3天、7天、10天有显著降低,有统计学意义。(2)热缩足反射潜伏期(PWL)变化:CFA组与NS组相比较,注射侧PWL在造模后第1天、3天、7天、10天、14天有显著降低,有统计学意义。(3) Catwalk步态参数变化:①Max Contact At(%):CFA组与NS组相比较,注射侧Max Contact At(%)在造模后第3天、7天、有显著升高,有统计学意义;②Max Contact Area(cm2): CFA组与NS组相比较,注射侧Max Contact Area(cm2)在造模后第1天、3天、7天、10天、14天有显著降低,有统计学意义;③Print Length(cm):CFA组与NS组相比较,注射侧Print Length(cm)在造模后第1天、3天、7天、10天有显著降低,有统计学意义;CFA组与NS组相比较,注射侧Print Width(cm)在造模后第3天、7天、10天有显著降低,有统计学意义;<br>  结论:通过在大鼠腰部肌肉组织中注射CFA的方法可以引发大鼠注射侧PWT、PWL等疼痛阈值的下降及步态变化,注射CFA所制作的大鼠腰痛模型可以用于TuiNa进行脊柱病相关的基础研究提供了一种可供选择的动物模型。<br>  第二章 实验动物推拿模拟仪的研制及推拿对CFA致大鼠腰痛模型痛阈变化及Catwalk步态参数的影响<br>  目的:应用实验动物推拿模拟仪对推拿手法刺激量进行量化,并对CFA致大鼠腰痛模型进行干预,观察推拿手法对大鼠腰痛模型的镇痛效应。<br>  方法:将16只SD大鼠随机分为两组:完全弗氏佐剂组(Complete FreundsAdjuvant Group,简称:CFA),完全弗氏佐剂+推拿组(CFA+TuiNa group),两组动物分别8只。将实验大鼠放在测试环境中连续适应1个星期后,连续两天连续两天测量其机械足反射阈值(PWT)、热缩足反射潜伏期(PWL)及Catwalk步态参数,取平均值作为造模前的基础数值,然后分别向CFA组大鼠和CFA+TuiNa组大鼠左侧腰段2(L2)~腰5(L5)注射2ml CFA,造模后于造模后第4天、6天、8天、11天、13天对CFA+TuiNa组的动物应用实验动物推拿模拟仪在大鼠右侧右侧小腿部腓肠肌的位置进行推拿手法的干预,CFA组不进行干预。干预过程中分别在第3天、7天、10天、14天对2组动物进行PWT、PWL及Catwalk步态参数等数据采集。<br>  结果:(1)机械足反射阈值(PWT)变化:CFA+TuiNa组与CFA组比较,CFA+TuiNa组左侧足底PWT在造模后第10天、14天有显著升高,有统计学意义。(2)热缩足反射潜伏期(PWL)变化:CFA+TuiNa组与CFA组比较,CFA+TuiNa组左侧足底PWL在造模后第7天、10天、14天有显著升高,有统计学意义。(3) Catwalk步态参数变化:①Max Contact Area(cm2):CFA+TuiNa组与CFA组比较,注射侧Max Contact Area(cm2)在造模后第7天、10天、14天有显著升高,有统计学意义;②Print Length(cm):CFA+TuiNa组与CFA组比较,注射侧Print Length(cm)在造模后第10天、14天有显著升高,有统计学意义;。<br>  结论:多次推拿手法对CFA致大鼠腰痛模型痛阈及Catwalk步态参数具有改善作用,这与临床上推拿手法对脊柱病具有积极治疗效果相一致。<br>  第三章 IB4阳性疼痛感受器药理学剔除对推拿镇痛效应的影响<br>  目的:在前两章研究结果的基础上应用IB4-SAP神经毒素对IB4阳性伤害性感受器进行药理学的特异性剔除,观察IB4阳性伤害性感受器剔除对推拿手法镇痛效应产生的影响,从感受器的角度论证推拿镇痛效应的产生可能伤害性感受器的激活有关。<br>  方法:本章第一节将动物按照随机数字法分2组,分别为IB4-SAP阻断组(IB4-SAP group)及PBS对照组(PBS group),每组动物各4只。将大鼠在麻醉状态下,分别向2组大鼠右侧坐骨神经鞘膜内注射5μ lIB4-SAP(400μ g/ml)和5μlPBS,手术后放入笼中饲养。7天后灌流后取坐骨神经组织,运用免疫荧光法观察IB4阳性伤害性感受器剔除情况。<br>  本章第二节将24只SD大鼠按照随机数字法分成3组,分别为CFA组(Complete Freund's Adjuvant,简称:CFA),IB4-SAP阻断组(CFA+SAP+TuiNagroup)及PBS对照组(CFA+PBS+TuiNa group),两组动物分别8只。将实验大鼠放在测试环境中连续适应1个星期后,连续两天测其机械足反射阈值(PWT)、热缩足反射潜伏期(PWL)及Catwalk步态参数,取平均值作为造模前的基础数值。然后分别向IB4-SAP阻断组和PBS对照组大鼠右侧坐骨神经鞘膜内注射5μlIB4-SAP(400μg/ml)和5μlPBS,手术后将大鼠放入笼中饲养7天,7天后分别向3组大鼠左侧腰段2(L2)~腰5(L5注射2ml CFA,造模后分别在第3天、7天、10天、14天对2组动物的PWT、PWL及Catwalk步态参数进行测试;并于造模后第4天、6天、8天、11天、13天对CFA+TuiNa组的动物进行推拿手法的干预。<br>  结果:(1)机械足反射阈值(PWT)变化:CFA+TuiNa+PBS组与CFA组比较,CFA+TuiNa+PBS组左侧足底PWT在造模后第3天开始出现上升趋势,造模后第7天较为明显,至第10天、14天有显著升高,有统计学意义;CFA+TuiNa+SAP组与CFA组比较,CFA+TuiNa+SAP组左侧足底PWT在造模后第3天开始出现上升趋势,此趋势一直持续到第14天;CFA+TuiNa+SAP组与CFA+TuiNa+PBS组比较,从造模后第3天至第14天,CFA+TuiNa+SAP组左侧足底PWT整体趋势低于CFA+TuiNa+PBS组。(2)热缩足反射潜伏期(PWL)变化:CFA+TuiNa+PBS组与CFA组比较,CFA+TuiNa+PBS组左侧足底PWT在造模后第3天开始出现上升趋势,造模后第7天较为明显,至第10天、14天有显著升高,有统计学意义;CFA+TuiNa+SAP组与CFA组比较,CFA+TuiNa+SAP组左侧足底PWT在造模后第3天开始出现上升趋势,此趋势一直持续到第14天;CFA+TuiNa+SAP组与CFA+TuiNa+PBS组比较,从造模后第3天至第14天,CFA+TuiNa+SAP组左侧足底PWT整体趋势低于CFA+TuiNa+PBS组。(3) Catwalk步态参数变化:①MaxContact Area(cm2):CFA+TuiNa+PBS组与CFA组比较,CFA+TuiNa+PBS组左侧足Max Contact Area(cm2)在造模后第3天开始出现上升趋势,造模后第7天较为明显,至第10天、14天有显著升高,有统计学意义;CFA+TuiNa+SAP组与CFA组比较,CFA+TuiNa+SAP组在造模后第3天开始出现上升趋势,此趋势一直持续到第14天;CFA+TuiNa+SAP组与CFA+TuiNa+PBS组比较,从造模后第3天至第14天,CFA+TuiNa+SAP组整体趋势低于CFA+TuiNa+PBS组。②Print Length(cm):CFA+TuiNa+PBS组与CFA组比较,CFA+TuiNa+PBS组左侧足Print Length(cm)在造模后第3天开始出现上升趋势,造模后第7天较为明显,至第10天、14天有显著升高;CFA+TuiNa+SAP组与CFA组比较,CFA+TuiNa+SAP组在造模后第3天开始出现上升趋势,此趋势一直持续到第14天;CFA+TuiNa+SAP组与CFA+TuiNa+PBS组比较,从造模后第3天至第14天,CFA+TuiNa+SAP组整体趋势低于CFA+TuiNa+PBS组。<br>  结论:应用IB4-SAP神经毒素可以对IB4阳性伤害性感受器进行成功剔除;IB4阳性伤害性感受器剔除后推拿镇痛效应减弱,但并没有完全消失,这表明IB4阳性伤害性感受器可能是接受推拿机械力学信息和伤害性信息的初级感觉神经元,但除了IB4阳性伤害性感受器外,可能还有其它接受推拿镇痛信息的感受器存在。

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