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摘要目的:<br>　　本实验采用miRNA芯片、基因芯片及生物信息学等多种研究手段，筛选及验证肝细胞内抗HBV的miRNA、mRNA表达谱，揭示壮药白花香莲解毒方抑制HBV复制与表达的疗效机制，并为寻找新的抗HBV治疗靶点提供理论基础。<br>　　方法:<br>　　1、通过腺病毒将全基因组合成的1.3倍HBV序列（1.3 Ploid HBV,HBV1.3P）转入HepG2细胞，构建HBV1.3P-HepG2细胞模型。应用qRT-PCR法测定0-9天HBV1.3P-HepG2细胞中HBV DNA、cccDNA水平，化学发光法、免疫荧光法检测上清液及细胞内HBsAg、HBeAg表达量。<br>　　2、采用CCK-8法检测不同浓度白花香莲解毒方对HBV1.3P-HepG2细胞增殖活性的影响;qRT-PCR法、化学发光法、免疫荧光法测定不同浓度、不同作用时间条件下，白花香莲解毒方对HBV DNA、HBsAg及HBeAg的影响;miRNA芯片及基因芯片检测HepG2空白组、细胞模型组、白花香莲解毒方干预组的miRNA/mRNA表达谱，生物信息学进行数据分析，筛选出目标miRNA及其靶mRNA。<br>　　3、采用双荧光素酶基因报告验证miRNA与靶mRNA的结合关系，采用慢病毒基因转染技术构建表达质粒，在HepG2.2.15及HBV1.3P-HepG2细胞模型中分别观察miRNA、mRNA单独转染及miRNA-mRNA共转染对HBVDNA、HBsAg及HBeAg的影响。<br>　　结果:<br>　　1、HBV1.3P-HepG2细胞模型能检测到HBV DNA、ccc DNA及HBsAg、HBeAg表达，在4-6天达到峰值水平，之后逐渐下降。<br>　　2、CCK-8法的最佳检测时间是加入试剂后2h，适宜细胞数范围是2×103-1.2×104个。在0.04-0.625mg干膏/ml范围，白花香莲解毒方对HBV1.3P-HepG2细胞增殖无抑制作用。在1.25-5mg干膏/ml范围，白花香莲解毒方对细胞增殖有抑制作用，且与药物干预的时间呈正相关关系。<br>　　3、在0.04-0.32mg干膏/ml范围，白花香莲解毒方对HBV DNA抑制作用呈量效关系，在0.625-1.25mg干膏/ml范围，对HBV DNA抑制作用达到峰值水平，结合CCK-8实验结果，以0.625mg干膏/ml为最佳干预浓度。同浓度情况下，白花香莲解毒方随干预时间增加，其HBV抑制作用增强，干预48h优于干预24h。白花香莲解毒方（0.625mg干膏/ml、干预48h）对HBV DNA复制的抑制率达41.85±2.35％。<br>　　4、miRNA芯片共筛选出20个发生显著变化，与白花香莲解毒方抑制HBV相关的miRNA，其中在模型组表达降低，同时药物干预组表达升高16个;在模型组表达升高，同时药物干预组表达降低4个。mRNA芯片共筛选出183个发生显著变化，与白花香莲解毒方抑制HBV相关的mRNA，其中在模型组表达升高，同时药物干预组表达降低88个，在模型组表达降低，同时药物干预组表达升高95个。根据miRNA/mRNA生物信息学分析及双荧光素酶基因报告，筛选出miR141-3P/PPARα、miR372-3p/NFIB、miR20a-5p/IL-8、miR-106a-5p/IL-8共4组进行干预HBV的体外功能验证。<br>　　5、miRNA干预HBV功能验证显示，在HepG2.2.15细胞、HBV1.3P-HepG2细胞中，miR-372-3p均能够促进HBV DNA复制及HBsAg表达，其HBV DNA水平分别是空白对照组的1.37倍、1.36倍(P＜0.05)。miR-141-3p均能抑制HBV DNA复制及HBsAg表达，其HBV DNA水平分别是空白对照组的59％、64％(P＜0.05)。miR-20a-5p的HBV DNA水平分别是空白对照组的96％、1.03倍(P＞0.05)。miR-106a-5p的HBV DNA水平分别是空白对照组的94％、95％(P＞0.05)。<br>　　6、mRNA干预HBV功能验证显示，在HepG2.2.15细胞、HBV1.3P-HepG2细胞中，PPARα均能促进HBV DNA复制及HBsAg表达，其HBV DNA水平分别是空白对照组的1.46倍、1.27倍(P＜0.05)。NFIB能抑制HBV DNA复制及HBsAg表达，其HBV DNA水平分别是空白对照组的76％、55％(P＜0.05)。IL-8能促进HBV DNA复制及HBsAg表达，其HBV DNA水平分别是空白对照组的1.54倍、1.62倍(P＜0.05)。<br>　　7、miRNA-mRNA共转染干预HBV功能验证显示，在HepG2.2.15细胞、HBV1.3P-HepG2细胞中，miR-141-3p和PPARα共转染的HBV DNA水平分别是只转入PPARα的78％、85％(P＜0.05)。miR-372-3p和NFIB共转染的HBV DNA水平分别是只转入NFIB的1.52倍、1.75倍(P＜0.05)。<br>　　结论：<br>　　1、所构建的HBV1.3P-HepG2细胞模型能表达HBV DNA、cccDNA、HBsAg、HBeAg等HBV标志物。<br>　　2、肝细胞内miR-372-3p、PPARα、IL-8能促进HBV复制与表达，miR-141-3p、NFIB能抑制HBV复制与表达，miR-20a-5p、miR-106a-5p对HBV复制与表达无明显影响。<br>　　3、白花香莲解毒方可能通过上调肝细胞内miR-141-3p，进而减少PPARα表达量;通过下调miR-372-3p，进而恢复NFIB表达量等途径共同抑制HBV复制与表达。