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摘要背景:托灭酸(Tolfenamic acid，2-[(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸）是一种新型的非甾体类抗炎药，其作用机理是通过抑制环氧合酶的产生而发挥解热镇痛的作用，目前临床上主要应用于类风湿关节炎、偏头痛等疾病的治疗。近年来，国内外学者对此进行了多方面的研究，发现托灭酸在抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡、干扰细胞信号转导、调节原癌基因与抑癌基因活性、抑制肿瘤血管形成等也发挥重要作用，对胰腺癌、食管癌、结直肠癌等消化系统恶性肿瘤都显示出抑制作用，但尚未报道托灭酸对胃癌的抗肿瘤活性，本课题旨在利用流式细胞术检测AGS细胞凋亡率、MTT法检测细胞增殖情况、Western Blotting法检测Bcl-2与Bax蛋白相对表达量等手段初步探索托灭酸对胃癌AGS细胞的抗肿瘤作用。<br>　　目的:研究托灭酸对胃癌AGS细胞的抗肿瘤效果及其机制。<br>　　方法:<br>　　1.通过AnnexinⅤ FITC/PI双染色，流式细胞术检测探讨托灭酸对胃癌AGS细胞凋亡率的影响;<br>　　2.通过MTT法测试不同浓度、不同时间托灭酸对胃癌AGS细胞生长的影响，并绘制生长曲线图;<br>　　3.通过Hochest33258核染色检测托灭酸对AGS细胞凋亡的影响，并与对照组对比，在荧光显微镜下观察细胞凋亡的差异;<br>　　4.通过Western Blotting法检测托灭酸作用下凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax相对表达量及Bcl-2/Bax比值。<br>　　结果：<br>　　1.阴性对照组、50μ mol/L、100μmol/L、200μ mol/L托灭酸组作用24小时后行流式细胞术检测凋亡率(％)分别为15.32±2.26、29.87±4.76、54.82±4.49、72.13±5.53。与对照组相比，托灭酸不同浓度的处理组对胃癌细胞的促凋亡作用明显增加，并且凋亡率随着药物浓度梯度的增高而增高。<br>　　2.胃癌AGS细胞经50μ mol/L、100μ mol/L、200μmol/L托灭酸处理后24h、48h、72h后，MTT法检测提示与阴性对照组对比，细胞增殖能力受到明显抑制，并且随着药物浓度的增大，抑制能力也增强。<br>　　3.对照组凋亡细胞数为2.32±0.54，托灭酸组为9.17±1.38，P＜0.05。与对照组相比，托灭酸组细胞在托灭酸作用24小时后，Hoechst33258染料核染色显示，浓染与碎裂细胞明显增多。<br>　　4.通过Western Blotting法检测50μ mol/L、100μ mol/L、200μ mol/L托灭酸处理后AGS细胞Bcl-2与Bax蛋白相对表达量，其中Bcl-2分别为1.42±0.11、0.95±0.14、0.63±0.08，Bax蛋白分别为0.28±0.03、0.57±0.05、0.86±0.09，P＜0.05，可以看出随着药物浓度的增加，Bcl-2/Bax蛋白比例减少。<br>　　结论：<br>　　1.托灭酸可通过抑制胃癌AGS细胞生长增殖和促进细胞凋亡以达到抗肿瘤的作用。<br>　　2.托灭酸促进胃癌AGS细胞凋亡的作用与Bcl-2蛋白表达的降低与Bax蛋白表达的增加有关。