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摘要小檗碱(BBR)是常用清热解毒药黄连的主要活性成分，能显著降低糖尿病患者和动物血糖，减轻体重，改善糖耐量和胰岛素抵抗。体内沉默信息调节因子1(Sirt1)是一种去乙酰化酶，在抗炎和调节敏感性脂肪组织糖脂代谢相关信号通路中与BBR作用靶点和生物学效应基本一致。因此，本文以3T3-L1脂肪细胞葡萄糖代谢紊乱为切入点，体外干扰Sirt1表达，探明BBR改善糖代谢是否依赖于Sirt1，为BBR的作用机制提供新的线索。<br>　　目的:<br>　　体外培养3T3-L1脂肪细胞，探明小檗碱对脂肪细胞Sirt1蛋白表达和糖代谢及其相关通路蛋白表达的影响是否依赖于Sirt1的介导。<br>　　方法:<br>　　1) Western Blot和荧光定量PCR检测不同浓度(1、5、10μMol/L)小檗碱对3T3-L1脂肪细胞中Sirt1表达的影响;2)将分化成熟的3T3-L1脂肪细胞用Sirt1抑制剂Ex527或慢病毒lv-Sirt1干扰Sirt1蛋白表达后分为四组，对照组，BBR组，Ex527(或lv-Sirt1)组，Ex527(或lv-Sirt1)+BBR组，作用24h后更换含1nM胰岛素和0.2％BSA的无酚红低糖培养基作用10h，收取细胞上清液，采用葡萄糖氧化酶法检测细胞的上清液中葡萄糖含量，以无酚红高糖培养基中糖含量相减，即为各组细胞葡萄糖消耗量;3)按2)将分化成熟的3T3-L1脂肪细胞分为四组，提取蛋白采用Western Blot检测脂肪细胞中LKB1ser428、AMPK-αThr172、ACCser79的磷酸化蛋白表达，免疫沉淀检测PGC-1α的乙酰化表达;4)将诱导成熟的3T3-L1脂肪细胞分为六组，其中三组用Ex527预处理1h，同时加入TNF-α或合并加入5μMol/L BBR，分别为对照组，TNF-α组，TNF-α+BBR组，Ex527组，Ex527+TNF-α组，Ex527+TNF-α+BBR组，作用24后，弃上清，用含有1 nmol/L Insulin的0.2％BSA DMEM处理15min后加入30μM2-NBDG和1μg/mlDAP2荧光探针的PBS37℃孵育2h，用高内涵细胞成像仪拍照并计算脂肪细胞平均荧光强度;5)按4)将诱导成熟的3T3-L1脂肪细胞分为六组，分别为对照组，TNF-α组，TNF-α+BBR组，Ex527组，Ex527+TNF-α组，Ex527+TNF-α+BBR组，作用24h，Western Blot检测AKTser473与IRS-1 Y612磷酸化表达。<br>　　结果:<br>　　1)BBR可显著上调3T3-L1脂肪细胞中Sirt1蛋白和基因的表达，且5μMol/L BBR作用最为显著(P＜0.05);2)BBR与正常组相比，BBR明显增加葡萄糖消耗(P＜0.05)，但在Sirt1被Ex527抑制或被lv-Sirt1敲减后，BBR增加葡萄糖消耗这一作用明显减弱;3) BBR明显增加LKB1ser428、AMPK-αThr172、ACCser79的磷酸化表达，并降低PGC-1乙酰化水平，但在Sirt1被抑制或敲减后，BBR这一作用被减弱;4)与正常组比较，TNF-α刺激后葡萄糖吸收减弱(P＜0.05)，BBR处理后，葡萄糖摄取增加50％(P＜0.05)，然而Sirt1被抑制后，BBR增加葡萄糖摄取作用减弱(P＜0.05);5)BBR有效恢复炎症因子TNF-α抑制下AKTser473活性损伤，而Sirt1被抑制或敲减后，BBR恢复AKT活性的作用减弱，然而BBR对IRS-1 Y612的影响未见明显变化。<br>　　结论:小檗碱依赖于Sirt1激活AMPK/AKT通路改善3T3-L1脂肪细胞糖代谢。