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摘要背景:原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis，PBC)是一种慢性胆汁淤积性自身免疫疾病。早期主要累及小叶间胆管及间隔胆管，肝内胆管上皮细胞（intrahepatic biliary epithelial cells，IBEC）在PBC的发病中起着重要的作用。间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)有向肝细胞分化的潜能，也可以通过分泌生长因子修复损伤的组织。有研究证明MSCs移植治疗PBC是安全有效的。然而具体机制尚不清楚。<br>　　目的:探讨MSCs对甘氨酸鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid，GCDC)造成胆管上皮细胞损伤的修复作用及机制，为MSCs治疗PBC提供依据。<br>　　方法:BEC体外培养后，经不同浓度的GCDC作用不同时间后，采用流式细胞术检测BEC AnnexinⅤ/7-ADD阳性凋亡细胞的百分数。在此基础上，通过MSCs与损伤的BEC共培养，通过流式细胞术检测AnnexinⅤ/7-ADD凋亡百分数、线粒体膜电位JC-1的表达及活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)表达量。CCK-8法(cell counting kit8)检测BEC的细胞活力，蛋白印迹法(WesternBlotting)检测各组PBC特异性自身抗原丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(E2components of the pyruvate dehydrogenase complex，PDC-E2)、凋亡相关蛋白天冬氨酸蛋白水解酶3/8/9（cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspases）、自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链(microtubule-associated protein-light chain3，LC3)的表达。免疫组织化学法染色各组BEC特异性标记角蛋白19（cytokeratin-19，CK-19）。免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3B的表达。酶联免疫吸附(enzymelinked immunosorbent assay，ELISA)检测患者血清及细胞培养上清血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达。<br>　　结果:1.GCDC可诱导BEC凋亡，1，000μM GCDC作用BEC2h、6h、24h后，与对照组相比凋亡细胞比例显著增加，（37.6±5.5、74.2±4.0、62.6±7.7）％vs（6.0±0.5、16.0±4.3、16.4±4.0）％，p＜0.001。2.MSCs与BEC共培养可以抑制GCDC引起的凋亡，（19.3±4.8）％vs（38.9±4.7）％，p＜0.05。MSCs可以部分缓解GCDC引起的BEC细胞线粒体膜电位的损伤，但差异无统计学意义;MSCs可部分抑制GCDC引起的BEC凋亡水解相关蛋白活化的Caspase8、Caspase9的表达。3.GCDC作用BEC后胆管上皮细胞特异性标志物CK19表达降低，而MSCs共培养后，CK-19的表达增加。作为PBC特异性自身抗原的PDC-E2在GCDC处理后，与对照组相比，相对表达量显著增加，（1.4±0.2）vs（0.7±0.1），(p＜0.05)，与MSCs共培养后，PDC-E2的相对表达量下降，(0.9±0.1)vs（1.4±0.2），(p＜0.05)。4.MSCs可抑制GCDC诱导的BEC自噬的激活。MSCs可以减少GCDC引起的LC3的表达。5.MSCs部分缓解GCDC对BEC细胞活力的影响。GCDC作用2h和6h可明显降低BEC的细胞活力，而MSCs共培养之后BEC的增殖能力有部分提高，但差异无统计学意义。6.MSCs共培养有缓解GCDC诱导的细胞内的活性氧自由基表达的趋势，但差异无统计学意义。7.MSCs减少BEC上清VEGF的表达。患者血清VEGF的水平明显高于健康对照组，(1128.0±650.4)pg/ml vs(92.6±39.8)pg/ml，(p＜0.05)。且在体外实验中MSCs共培养可显著降低GCDC作用后BEC培养上清的VEGF表达水平，（296.5±38.8）pg/ml vs（712.7±90.2）pg/ml，(p＜0.001)。<br>　　结论:GCDC可在体外对BEC造成损伤。而MSCs可通过减少BEC的凋亡，抑制其自噬的激活，减少PDC-E2表达，增加CK-19表达，从而对BEC产生修复作用，其机制可能与下调BEC表达VEGF有关。