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摘要研究背景及目的<br>　　肾癌是少数几个全球范围内发病率逐年上升的肿瘤之一，早期没有显著的临床表现，目前只能通过超声、CT等影像学检查发现，而缺少能直接通过体液检测的肿瘤标记物。大约有30-40％的肾癌患者在确诊的时候就已经发生转移，并且早期诊断的肾癌患者相较于晚期转移的患者其5年生存率相差甚远。所以，实现肾癌的早期诊断和筛查具有极其重要的临床意义。<br>　　本研究旨在通过对尿液外泌体中的Lnc-RNA进行新一代测序(next-generationsequencing，NGS)分析，寻找能够提示早期肾癌的Lnc-RNA作为其早期诊断标记物，从而结合影像学检查，更早地诊断肾癌。<br>　　外泌体(exosome)是由细胞内多泡小体(multivesicular body，MVB)与细胞膜融合后，释放到细胞外微环境中的一种直径约30-120nm的膜性囊泡。其内含有蛋白质、各种RNA等多种成分。包括肿瘤细胞在内的多种细胞都会分泌外泌体，并在血液、尿液、唾液、乳汁等多种体液中可分离、检测。长链非编码RNA(Long non-coding RNA，LncRNA)是指长度大于200个核苷酸(bp)的非编码RNA。现有研究认为，Lnc-RNA具有良好的生物标记开发潜力。<br>　　研究方法<br>　　1)选取肾透明细胞癌患者及年龄、性别相匹配的正常对照者各10人，留取晨尿。2）应用超速离心法分离出外泌体，并对所获得的外泌体进行透射电镜检查、粒径分布、蛋白标记物(CD63、ALIX、TSG101)等验证。3）利用新一代测序技术分析肾透明细胞癌患者和正常人尿液外泌体内差异表达的LncRNA，并跟据差异倍数、P值，筛选出差异表达显著的LncRNA。4）将所筛选出的差异最明显的LncRNA在成熟的肾癌细胞系中进一步验证其表达量。5）加大尿液外泌体的样本量，分析目标LncRNA的表达水平。7）绘制目标LncRNA的ROC曲线，评价其敏感性和特异性等临床诊断应用价值。<br>　　研究结果<br>　　1)通过超速离心法，可以成功分离富集尿液外泌体;2）成功筛选出可以提示肾癌早期诊断的LncRNA NR_040448和NR_033390，发现其在成熟的肾癌细胞系、扩大的肾癌尿液外泌体样本中均高表达。<br>　　结论<br>　　尿液外泌体内的LncRNA NR_040448和NR_033390有希望成为肾癌早期诊断的潜在标记物，其敏感性和特异性还需要更大样本的临床资料进行验证。