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从胃癌NLRP3/caspase-1的表达探讨健脾散结方的抗肿瘤作用

摘要目的:观察胃癌患者血液及裸鼠胃癌移植瘤肿瘤组织中NLRP3、easpase-1的表达及健脾散结方对其表达的影响,同时对胃癌患者接受健脾散结方治疗后临床获益进行评估,从临床研究及动物实验两方面探索健脾散结方可能的抗肿瘤作用靶点。<br>  方法:<br>  第一部分:收集60例胃癌患者,随机分为对照组(30例)和中药组(30例),并与15例健康人进行比较。中药组服用健脾散结中药方,每日一剂,分两次服,28天为一周期,连续服用2周期,辅予营养支持治疗;对照组仅予营养支持治疗;健康组不予处理。于试验前后采用RT-PCR及ELISA对胃癌患者血液中NLRP3、caspase-1的表达水平进行检测,健康受试者在试验结束后进行NLRP3、caspase-1的检测。另在试验前后对胃癌患者进行中医证候量表、生活质量量表(EORTCQLQ-C30量表)、功能状态评分(KPS)的测试。<br>  第二部分:构建裸鼠胃癌皮下移植瘤模型。从液氮中取出SGC-7901胃癌细胞株。在无菌条件下,繁殖胃癌细胞,取生长良好的细胞为瘤源,用胰酶消化后,收集细胞,在显微镜下计数,调整浓度为4.0x107/毫升;取对数生长期的胃癌细胞注射至裸鼠皮下。造模成功后,随机分成对照组和中药组,中药组每天予健脾散结方灌胃,对照组予生理盐水灌胃。21天后,对照组荷瘤裸鼠取瘤(肿瘤组)及瘤周组织(瘤周组),中药组荷瘤裸鼠取瘤组织(中药组)。采用RT-PCR、western-blot检测肿瘤组、瘤周组、中药组组织中NLRP3、caspase-1的表达。<br>  结果:<br>  第一部分:健脾散结方对胃癌患者血液中NLRP3/caspase-1表达的影响<br>  1.入组时,对照组、中药组胃癌患者血液中NLRP3、caspase-1mRNA及蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05),具有可比性。试验2个周期后,对照组与中药组比较,差异有统计学意义,中药组NLRP3、caspase-1mRNA及蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。与健康组比较,对照组、中药组NLRP3、caspase-1mRNA及蛋白表达水平均低于健康组(P<0.05)。胃癌患者NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达水平与临床分期均呈负相关(P<0.05),临床分期越高,其表达水平越低。<br>  2.治疗前对照组、中药组胃癌患者中医证候评分差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组间及组内中医证候积分比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前对照组、中药组生活质量评分无统计学差异(P>0.05)。治疗后对照组与中药组组间比较,中药组总健康状况、疲倦、恶心与呕吐、失眠、食欲丧失改善优于对照组(P<0.05);对照组组内比较,疲倦症状有改善(P<0.05)。中药组组内比较在总健康状况、疲倦、恶心与呕吐、失眠、食欲丧失、便秘方面均有改善(P<0.05)。治疗前对照组、中药组KPS评分无统计学差异(P>0.05),治疗后中药组与对照组的稳定率分别是93.33%、86.67%;有效率分别是53.33%、16.67%。<br>  第二部分:健脾散结方对裸鼠成瘤及瘤组织中NLRP3/caspase-1表达的影响<br>  1.实验过程中,与中药组相比,对照组荷瘤裸鼠皮下瘤生长更为迅速,第10天、14天、21天皮下瘤体积比较均有统计学差异,中药组瘤体积相对小(P<0.05)。实验结束后两组肿瘤瘤重比较有统计学差别(P<0.05)。<br>  2.肿瘤组、瘤周组、中药组组织中NLRP3 mRNA表达分别为:0.0059±0.002、0.0344±0.006、0.0179±0.005。肿瘤组、瘤周组、中药组caspase-1 mRNA的表达分别为:0.0265±0.007、0.1233±0.019、0.0609±0.021。肿瘤组、瘤周组、中药组NLRP3蛋白灰度值分别为:4755.09±1034.24、9944.47±1590.71、6572.16±1259.48。肿瘤组、瘤周组、中药组caspase-1蛋白灰度值分别为:2868.79±340.07、5246.83±1189.15、3998.44±506.03。肿瘤组与瘤周组、肿瘤组与中药组、中药组与瘤周组NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达水平比较,差别均有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组织中NLRP3、caspase-1mRNA及蛋白表达水平低于瘤周组织;中药组NLRP3、caspase-1mRNA及蛋白表达水平高于肿瘤组。NLRP3、caspase-1相关性分析:NLRP3与caspase-1的表达水平存在正相关(P<0.001)。<br>  结论:<br>  1.健脾散结方可以上调胃癌患者血液中NLRP3、caspase-1的表达,且能够提高胃癌患者生活质量、改善其临床症状。<br>  2.健脾散结方可以上调裸鼠胃癌移植瘤肿瘤组织中NLRP3、caspase-1的表达,且能抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长。

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