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摘要目的：<br>　　1.摸索bufalin在联合HCPT序贯给药时低毒、高效的给药剂量。<br>　　2.从线粒体凋亡途径、PI3K/AKT/GSK-3β凋亡信号通路以及p53基因依赖的凋亡调控途径三个角度，对联合两种Topo抑制剂序贯给药的机制进行初步探讨。<br>　　方法：<br>　　建立去势抵抗件前列腺癌细胞株DU145裸鼠皮下移植瘤模型，将造模成功的裸鼠随机分为对照组NS组、H组、B组和序贯组H4B组、H6B组、H8B组，给药干预后第39天处死各组裸鼠。<br>　　1.通过测算瘤体的重量、体积等形态学指标评价各给药组的抑瘤效果。<br>　　2.对瘤体行HE染色以分析肿瘤细胞的死亡程度，TUNEL法荧光染色标记凋亡细胞以评价肿瘤细胞的凋亡程度，免疫组化检测瘤体内增殖细胞核抗原PCNA的表达以评价肿瘤细胞的增殖程度。<br>　　3.Western bolt检测裸鼠前列腺癌皮下移植瘤内相关凋亡通路蛋白(Bax、Bcl-XL、pAKT、GSK-3β、pdcd4、p53)的表达，初步探究联合两种Topo抑制剂序贯给药可能存在的机制。<br>　　结果：<br>　　1.对各组瘤体作形态学统计分析，序贯组中只有H6B组和H8B组能抑制瘤体的生长（重量、体积较对照组均有明显降低，且抑瘤率升高）(P＜0.05)，但H6B组和H8B组之间对肿瘤体积和重量的抑制差异尚不存在统计学意义(P＞0.05)。<br>　　2.对各组瘤体进行HE染色，并作常规病理分析，给药各组肿瘤中央部位均存在大小不一的空腔，镜下弥漫无结构嗜酸性红染物且不见核碎屑，腔内肿瘤细胞数明显减少，其中H组、B组和H4B组中央部呈轻度改变，腔内尚有间质连接，H6B组和H8B组中央部呈重度改变，镜下不见原有的组织结构。<br>　　3.对各组瘤体进行TUNEL法荧光染色标记凋亡细胞，通过记录阳性细胞的IOD进行半定量统计分析，序贯组中只有H6B组和H8B组能促进瘤体细胞的凋亡(P＜0.05)，其中H6B组对促进细胞凋亡的作用最大(P＜0.05)。<br>　　4.对各组瘤体内PCNA进行免疫组化染色，通过记录阳性表达细胞的IOD进行半定量统计分析，序贯组中只有H6B组和H8B组能抑制PCNA的表达(P＜0.05)，其中H6B组对抑制PCNA表达的作用最佳(P＜0.05)。<br>　　5.Western-bolt检测各组瘤体中Bax、Bcl-XL、p53、pdcd4、pAKT、GSK-3β蛋白含量，其中促凋亡蛋白Bax、p53、pdcd4、GSK-3β含量分别按NS组、B组、H组、H4B组、H8B组、H6B组依次递增，抑凋亡蛋白Bcl-XL、pAKT含量则分别按NS组、B组、H组、H4B组、H8B组、H6B组依次递减(P＜0.05)。<br>　　结论：<br>　　1.2mg/kg HCPT腹腔注射后8小时注射0.6mg/kg bufalin的序贯给药方式对裸鼠前列腺癌皮下移植瘤在抑增殖、促凋亡的方面效果最佳。<br>　　2.联合序贯给药在促进肿瘤凋亡的过程中，与线粒体凋亡途径、PI3K/AKT/GSK-3β凋亡信号通路以及p53基因依赖的凋亡调控途径密切相关。