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摘要近年来，恶性肿瘤已成为威胁人类健康的最危险疾病之一。肿瘤微环境是肿瘤细胞及其招募的多种细胞所形成的一个高度异质性的环境，其组分包括肿瘤细胞、间质细胞，以及细胞外基质和分泌于其中的细胞因子等等。其中间质细胞又包括浸润的免疫细胞、内皮细胞与周细胞，以及成纤维细胞等，在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用。大量研究表明，肿瘤间质中的成纤维细胞与肿瘤细胞之间存在密切的相互作用关系。间质成纤维细胞在肿瘤细胞招募下活化成为肿瘤相关成纤维细胞（Cancer-associated fibroblasts，CAFs），CAF细胞则分泌多种细胞因子直接参与肿瘤进程，包括促进增殖与转移、协助免疫逃逸、影响代谢情况等。<br>　　在课题组以往的研究中，发现小鼠结肠癌细胞CT26能够降低间质成纤维细胞中微管蛋白酪氨酸连接酶(Tubulin tyrosine ligase，TTL)的表达水平，受调控的成纤维细胞IL-6表达量增加，进而促进肿瘤生长。而人结肠癌临床样本中TTL的表达水平也与病人预后呈现相关性。据目前已有的文献来看，TTL在一些种类的肿瘤中有也有相似的表达下调现象且与病人预后相关，但其作用机制仍不清楚。因此，这一发现可能预示了一种新的肿瘤细胞-成纤维细胞调控机制。基于此背景，本课题主要对TTL上游的调控机制进行研究。<br>　　研究方法与结果:<br>　　1）通过生物信息学分析工具预测可能调控小鼠TTL表达水平的microRNA，结果显示miR-124、miR-214、miR-506等三种候选miRNA抑制小鼠TTL表达的预测值相对较高。<br>　　2）经miRNA模拟物(mimics)脂质体转染实验发现miR-506能够显著降低小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的TTL表达水平。<br>　　3）为探究CT26细胞以何种方式递送miRNA，以超速离心法分离得到CT26来源的胞外囊泡（Extracellular vesicles，EVs）并进行透射电子显微镜成像;以特异性探针法检测胞外囊泡RNA提取物，直接检出miR-506核酸序列。<br>　　4）将胞外囊泡重悬于培养基直接对MEF细胞进行培养实验，能够显著下调TTL表达水平。实验中所用CT26细胞无需诱导即可分泌含miR-506的胞外囊泡。结果表明，小鼠结肠癌细胞CT26能够通过胞外囊泡递送miR-506，下调胚胎成纤维细胞MEF的TTL表达水平。这一结论解释了早先研究中发现的结肠癌细胞调控成纤维细胞TTL表达水平、进而促进成纤维细胞促肿瘤作用的现象。<br>　　本课题首次发现肿瘤细胞来源的miR-506能够通过胞外囊泡递送，并调控间质细胞TTL表达。联系近年来的相关研究，miR-506通常被认为是肿瘤细胞内下调多种促癌基因表达的分子，并且可能成为一种新型肿瘤治疗分子，而本课题的结论则显示miR-506通过调控间质成纤维细胞间接发挥促肿瘤作用。考虑到胞外囊泡递送途径可能存在对miRNA的选择性包涵、富集机制，可能仍有复杂的miRNA介导细胞间调控机制尚未被充分揭示，因此若将miR-506作为治疗分子可能存在潜在的副作用。然而本课题主要针对小鼠结肠癌模型中的miR-506进行了研究，miR-506在其他小鼠、人肿瘤模型以及临床样本中是否存在相似的促肿瘤机制仍然有待进一步的深入探讨。