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摘要目的:电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channel，VDAC)是线粒体外膜众多蛋白中的一种。研究表明，VDAC1基因在很多癌症组织中呈现过表达，包括肺癌、宫颈癌、胃癌、胰腺癌、喉癌以及血液系统恶性肿瘤等，从多方面介入细胞增殖及凋亡的过程。VDAC1基因的高水平表达能够增加肿瘤细胞的能量依赖性过程，包括肿瘤细胞的增殖性和侵入性。目前为止，VDAC1在乳腺癌中所起到的作用仍然鲜有报道，有待深入探讨，本研究拟通过siRNA沉默乳腺癌MCF-7细胞中的VDAC1基因，从而探讨VDAC1沉默对MCF-7细胞增殖及周期的影响。<br>　　研究方法:根据GenBank中VDAC1基因的CDS区序列，设计并合成3条针对VDAC1的特异性siRNA序列及一条阴性对照序列NC，分别为:siRNA-1:CUGACGUUUACAGAGAAAUTT、siRNA-2: GCGACAUGGAUUUCGACAUTT、siRNA-3: GCGGCUCCAUUUACCAGAATT，并合成阴性对照序列siRNA NC:UUCUCCGAACGUGUCACGUTT，选择对数生长期的MCF-7细胞经过脂质体2000介导将VDAC1siRNA干扰片段转染入MCF-7细胞。细胞转染48 h后，通过Real-timePCR检测细胞中VDAC1 mRAN的表达程度，Western blot检测细胞中VDAC1蛋白的表达程度，使用SPSS18.0软件进行组间单因素方差的统计学比较，筛选出一条干扰效果最佳片段。选出最佳片段后应用Real-time PCR和Western blot的方法检测MCF-7细胞被转染后其内VDAC1的表达程度，进一步对siRNA干扰VDAC1的表达效果进行验证。将MCF-7细胞分为control、NC、siRNA组，control组细胞正常培养，NC组细胞转染设计出的阴性对照序列，siRNA组细胞转染筛选出的siRNA序列，分别于转染后0h，24h，48h，72h，96h，选用MTT法检验MCF-7细胞被转染后的增殖程度，转染后72h，采用流式细胞术检验MCF-7细胞被转染后的周期变化情况，同时Western blot方法检测周期蛋白D1的表达。<br>　　结果:<br>　　1、siRNA沉默VDAC1实验。Real-time PCR检测结果显示，Control、NC、siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3组细胞VDAC1 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.06、0.93±0.03、0.26±0.01、0.52±0.03、0.71±0.03。Western blot检测结果显示Control、NC、siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3组细胞VDAC1蛋白的相对表达量分别为1.00±0.02、0.93±0.02、0.30±0.06、0.46±0.05和0.54±0.05。无效干扰序列NC对细胞中VDAC1的表达水平无显著影响(P＞0.05)，siRNA-1（CUGACGUUUACAGAGAAAUTT）的干扰VDAC1表达的效果最为明显(P＜0.01)，用于后续检测。成功在MCF-7细胞系中转染了VDAC1-siRNA，转染后能够明显抑制VDAC1的表达(P＜0.01)。Real-time PCR结果显示Control、NC和siRNA组细胞VDAC1 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.05、1.18±0.07和0.25±0.01。Western blot结果显示Control、NC和siRNA中VDAC1的蛋白相对表达量为1.00±0.02、1.08±0.08和0.30±0.03。<br>　　2、VDAC1沉默对MCF-7细胞增殖的影响。MTT检测表明，干扰VDAC1表达后第2天起MCF-7细胞增殖水平显著下降，第2-4天NC组细胞的平均OD值为0.458±0.038、0.798±0.009和0.914±0.074，siRNA组细胞的平均OD值为0.377±0.034、0.528±0.067、0.529±0.073。<br>　　3、VDAC1沉默对MCF-7细胞周期及周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。转染后的MCF-7细胞通过流式细胞术的检测可见G1期阻滞，G1期细胞在control组中的比例为56.8％，NC组G1期比例为53.6％，siRNA组G1期比例为67.2％。同时Cyclin D1蛋白表达下调，Western blot结果显示Control、NC和siRNA中CyclinD1的蛋白相对表达量为1.00±0.03、0.97±0.01和0.62±0.06，siRNA组细胞与NC相比，Cyclin D1蛋白表达显著下降（P＜0.01）。<br>　　结论:<br>　　1、VDAC1干扰序列siRNA-1(CUGACGUUUACAGAGAAAUTT)显著降低MCF-7细胞中VDAC1的表达水平;<br>　　2、干扰MCF-7细胞中VDAC1表达显著抑制细胞增殖能力;<br>　　3、干扰MCF-7细胞中VDAC1表达显著增加细胞G1期阻滞并能显著抑制Cyclin D1蛋白水平的表达。<br>　　VDAC1沉默能够有效的抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖，促进凋亡，为乳腺癌治疗提供新靶点。