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摘要目的：年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）是大于50岁成年人群主要的致盲眼病之一，尤其在西方国家是最主要的致盲眼病。血管内皮生长因子单克隆抗体（雷珠单抗）玻璃体腔注射是临床湿性AMD的主要治疗手段。在玻璃体腔内注射抗VEGF药物后，约30％-40％的湿性AMD患者能迅速提高视力，但仍有17％的患者视力无明显提高或继续下降。由于玻璃体腔注射抗VEGF药物，使生理性分泌的VEGF过度被拮抗。而血管内皮细胞生长因子是人体必需的细胞因子，对维持视网膜色素上皮(RPE)细胞和眼底神经、血管内皮细胞的正常功能有重要作用。这就增加了引发眼底视网膜功能损害等副作用的可能性。综上所述，对年龄相关性黄斑变性的发病机制的深入研究可能为完善、探索其新的治疗靶点提供线索和思路。IL-8是一种重要的炎性因子，不仅在全身炎症反应中发挥重要作用，还与很多眼部异常密切相关。研究表明，IL-8参与了青光眼虹膜新生血管的生成过程，并发挥重要作用。并且眼内的IL-8大部分都集中在RPE的脉络膜面表达。有研究表明，在增殖性糖尿病性视网膜病变(PDR)中，血管内皮生长因子和IL-8协同作用，共同诱导炎症和新生血管的生成。一定条件下，如缺血、缺氧、氧化应激等发生时，都可以促进IL-8表达升高，同时IL-8可破坏血-视网膜屏障(blood-retinal barrier，BRB)。在血白蛋白不断渗漏的作用下，视网膜色素上皮细胞外基质产量升高，并促进血管内皮的增殖、迁移，从而导致眼内新生血管的形成。有研究表明AMD的发展过程中IL-8的含量提高，但在AMD发病机制中的作用尚不明确，本研究通过研究IL-8在AMD病程中的作用旨在为AMD的防治和机制研究提供新的线索。<br>　　方法：⑴ELISA法测定湿性AMD患者和年龄相关性白内障(age-related cataract，CAT)患者房水中IL-8蛋白的含量。⑵ELISA法检测CNV模型鼠造模前1天及造模后1、3、5、7天脉络膜视网膜复合体中IL-8的含量。⑶qRT-PCR法检测CNV模型鼠造模前1天及造模后1、3、5、7天脉络膜视网膜复合体中IL-8mRNA表达情况。⑷ARPE-19细胞IL-8免疫荧光染色。⑸ARPE-19细胞和P3人RPE细胞分别培养12h、24h和48h。ELisa法检测其培养液上清中IL-8蛋白的浓度。⑹MTS法测定不同浓度的IL-8对ARPE-19细胞活性的影响。⑺ARPE-19细胞分组给予不同处理因素:第1组（阴性对照组）给予无血清1640培养液2mL;第2组(IL-8组)给予含10ng/ml IL-8的无血清1640培养液2mL;第3组(IL-8+H-100组)给予含10ng/ml IL-8及2肛g/ml H-100（IL-8RA/B抗体）的无血清1640培养液2mL;第4组（TNF-α组）给予含10ng/ml TNF-α的无血清1640培养液2mL;第5组给予含10ng/mLTNF-α及2μg/ml H-100的无血清1640培养液2mL。在给予处理因素后48小时收集培养液的上清，ELISA法测定ARPE-19细胞培养液上清中MCP-1、VEGF-A及TGF-β2的含量⑻qRT-PCR法检测上述各组细胞中MCP-1、VEGF-A及TGF-β2的mRNA水平。⑼Western-Blot法检测上述各组细胞MCP-1、VEGF、TGF-β2蛋白表达情况。⑽EDU免疫荧光染色法检测IL-8及其拮抗剂对HUVEC细胞增殖能力的影响。⑾Transwell检测IL-8及其拮抗剂对HUVEC细胞迁移能力的影响。⑿Tube Formation分析IL-8及其拮抗剂对HUVEC细胞体外血管生成能力的影响。⒀统计学分析:所有统计学处理均采用SPSS13.0软件包进行。实验数据用均数±标准差表示，两组定量资料的组间比较采用独立样本t检验，多组定量资料之间的比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)。P＜0.05有统计学意义。<br>　　结果：⑴AMD组房水中IL-8浓度明显高于对照组中IL-8蛋白的平均浓度。⑵小鼠CNV模型建立后，ELisa法检测脉络膜视网膜复合物中IL-8含量明显升高，并于第3天达到高峰。⑶qRT-PCR测定IL-8 mRNA表达水平于小鼠CNV建模后第1天大幅升高，并于第3天到达高峰。⑷免疫荧光染色可见IL-8在ARPE-19细胞的细胞质中表达，细胞核中未见表达。⑸ARPE-19和P3人RPE细胞在分别培养12h、24h和48h后，其培养液上清中IL-8含量均无统计学差异。⑹一定浓度的IL-8(10、15、20 ng/ml)作用24h后，ARPE-19细胞的增殖活力明显下降，且当IL-8浓度在10ng/mL附近时，其下降水平最显著。⑺10ng/mlIL-8作用ARPE-19细胞48h，培养液上清中VEGF-A、MCP-1的浓度显著升高，TGF-β2的含量无明显变化;一定浓度的H-100（1μg/ml和2μg/ml）作用ARPE-19细胞48h，较IL-8组和TNF-α组，培养液上清中VEGF-A、MCP-1的浓度显著下降。⑻10ng/ml IL-8作用ARPE-19细胞48h，VEGF-A、MCP-1 mRNA的表达水平明显升高，TGF-β2mRNA的表达无明显变化;一定浓度的H-100（1μg/ml和2μg/ml）作用ARPE-19细胞48h，较IL-8组和TNF-α组，VEGF-A、MCP-1 mRNA的表达明显下降。⑼10ng/ml IL-8作用ARPE-19细胞48h，MCP-1、VEGF的蛋白表达明显升高，TGF-β2的表达无明显变化;一定浓度的H-100（1μg/ml和2μg/ml）作用ARPE-19细胞48h，较IL-8组和TNF-α组，VEGF、MCP-1 mRNA的蛋白表达明显降低。⑽10ng/ml IL-8作用于HUVEC细胞后，EDU染色阳性细胞所占细胞总数比例较对照组明显升高，一定浓度的H-100（1μg/ml和2μg/ml）作用HUVEC细胞后，与IL-8组比较，EDU染色阳性细胞所占细胞总数比例明显下降。⑾10ng/ml IL-8作用于HUVEC细胞24h后，Transwell小室滤膜外侧细胞数与对照组的比值较对照组比值明显升高，一定浓度的H-100（1μg/ml和2μg/ml）作用于HUVEC细胞24h后，滤膜外侧细胞数与对照组的比值较IL-8组比值明显降低，差异有统计学意义。⑿10ng/ml IL-8作用于HUVEC细胞4h后，成管细胞数较对照组明显增多，一定浓度的H-100（1μg/ml和2μg/ml）作用于HUVEC细胞4h后，成管细胞数较IL-8组明显减少，且随着H-100浓度的增高，其减少幅度有增强的趋势。<br>　　结论：湿性AMD患者房水中IL-8的含量显著提高，激光诱导的小鼠CNV模型中IL-8的蛋白含量和mRNA表达均明显升高，说明IL-8在湿性年龄相关性黄斑变性的病程进展中可能发挥重要作用。ARPE-19细胞和P3人RPE细胞可表达、分泌IL-8。IL-8可明显降低ARPE-19细胞的增殖活力，且该作用具有一定的剂量依赖性，10ng/mL浓度附近的IL-8最明显。IL-8可以促进ARPE-19细胞中MCP-1的表达上调，并促进ARPE-19细胞分泌MCP-1蛋白，提高MCP-1的蛋白表达量。IL-8可以促进ARPE-19细胞中VEGF-AmRNA的表达上调，并促进ARPE-19细胞分泌VEGF-A蛋白，提高VEGF的蛋白表达量。IL-8对ARPE-19细胞表达、分泌TGF-β2的调节作用不明显。IL-8拮抗剂可大部分抑制IL-8和部分抑制TNF-α导致的MCP-1、VEGF表达、分泌升高。IL-8可促进HUVEC细胞增殖、迁移及体外血管生成能力，促进新生血管的形成。IL-8拮抗剂H-100可大部分阻断IL-8促进HUVEC细胞增殖、迁移及体外血管生成能力。且随着H-100剂量越高，其阻断效果越显著。