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摘要研究背景:<br>　　弹性纤维是提供皮肤和其他组织弹性的关键结缔组织组分。这些纤维由弹性蛋白和许多弹性蛋白相关的微纤维蛋白组成，它们通过许多步骤组成复合纤维网络。功能性弹性纤维的生物发生需要多种细胞过程，包括线粒体功能，分泌途径中的特定分子以及弹性纤维组分时间和空间上的有序产生。上述过程的任何步骤的异常可导致表现为弹性纤维功能丧失的皮肤病。典型的皮肤弹性纤维疾病是皮肤松弛综合症，一种临床和遗传异质性疾病，其特征为松弛和下垂的皮肤，皮肤以外的表现集中在肺和动脉血管上。皮肤松弛症(Cutis Laxa， CL)最早报道于1832年。该病患者的皮肤有明显特征:真皮内弹性纤维减少、疏松、形态改变，而胶原纤维及其他成分基本正常。根据发病时间把该病分为先天性皮肤松弛症和获得性皮肤松弛症，先天性皮肤松弛症多于出生后即发现，后天性皮肤松弛症多于成年发病。目前已知的先天性皮肤松弛症致病基因均作用于弹力纤维合成的通路。对于皮肤松弛症的治疗报道较少，尽管很多人认为整形外科手术是唯一有效治疗手段，但是缺少具体的手术方法和和结果。<br>　　研究目的:<br>　　我科于2012-2015年收治3例先天性皮肤松弛症患者，并应用多方向浅筋膜悬吊除皱术进行治疗。<br>　　首先对这3例患者的随访结果进行总结，分析该术式对患者的外貌起到的改善作用以及患者的复发特点。因案例稀少，要对该病进行深入研究需要动物模型。在文章的第二部分开展动物实验，一是研究SD大鼠皮服弹力纤维的合成期，二是研究皮内注射青霉胺是否能够成为制作皮肤松弛症模型的有效方法。<br>　　研究方法:<br>　　研究共分为两部分，第一部分是临床病例的经验性总结，第二部分为动物实验。<br>　　第一部分<br>　　回顾了从2012年至2015年临床上采用多方向浅筋膜悬吊除皱术治疗的先天性皮肤松弛症患者。对患者术后短期和长期的随访照片进行分析，通过患者及家属的描述了解其对术后效果的满意程度。根据以往报道和面部组织解剖学、弹力纤维的组织学分布对术式进行分析。取术前、术后患者的皮肤样本做弹力纤维特殊染色，观察弹力纤维形态特点。<br>　　第二部分<br>　　1.实验分组第一部分:按照大鼠周龄共分为G15、G17、G19、P1、P1W、P2W、P6w、P10w、P20W、P48W共10组。G15-G17由雌雄大鼠交配后按孕期剖腹取胎鼠，P1-P2W由雌雄大鼠交配后产乳鼠并饲养至目标年龄，P6W、P10W、P20W由动物公司直接购买，P48W由动物公司购买后饲养至目标年龄。胎鼠样本整个包埋，其余取鼠背肩胛皮肤进行包埋。第二部分:雌雄鼠交配后孕鼠分别标记为1-5号，各自所分娩的胎鼠即归为1-5组。每组随机挑选雄性乳鼠6只。1-3组为实验组，4组为阴性对照组注射等量生理盐水，5组不注射任何试剂，为空白对照组。1组给药剂量为10mg/100g，2组给药剂量为5mg/100g，3组给药剂量为1mg/100g。按照所有样本平均体重计算每组给药量。<br>　　2.皮肤组织学检测:在HE染色下观察表皮与真皮厚度的变化;采用弹力蛋白抗原(Elastin)免疫组化染色观察弹力蛋白表达数量变化的情况;Elastin VanGieson染色分别对胶原纤维和弹力纤维染色并观察其形态、数量变化。<br>　　3.弹力蛋白和弹力纤维半定量检测:应用ImageproPlus(美国，MediaCybernetics)软件对显色强度进行计算。操作步骤为矫正背景光密度→选择测量范围→设置测量参数→选色→测量积分光密度→测量范围面积→计数→数据收集。选色参数设置:免疫组化H0-29 S任意I背景参数（黄褐色）;Verchoeff弹力纤维选择黑色，胶原纤维选择蓝色。应用Microsoft Excel(美国，Microsoft)和SPSS19.0（美国，IBM）进行数据收集和统计。<br>　　研究结果:<br>　　1.第一部分3位患者术后均存在不同程度复发。患者及其家属随访时均对手术效果持肯定态度。3人的复发部位均以颏颈部最重，面颊区较轻。患者1和患者2的颏下颌形态改善较明显，颈部及鼻唇沟皮肤皱褶复现。患者3术后形态改善对比不如前2者明显。所有患者切口愈合情况较好，未见瘢痕增生。<br>　　2.第二部分<br>　　研究一从染色照片看，大鼠从胚胎期到出生后弹力纤维数量增多，与胶原纤维走行一致，真皮浅层细密，真皮深层粗大疏松。从半定量分析结果看，弹力蛋白出生时到达峰值，第10周后迅速下滑，而弹性纤维的峰值错后一周，高峰后至老年保持相对稳定的高度。<br>　　研究二从染色照片看，高浓度注射组弹力纤维形成数量明显减少，缺乏分枝网状结构，胶原纤维断裂。低浓度注射组弹力纤维数量形态与对照组无可见差别。从半定量结果看，高浓度组弹力纤维合成减少，缺乏分枝网状结构，弹力蛋白表达增加，低浓度组和对照组无显著差异。<br>　　研究结论:<br>　　第一部分<br>　　皮肤松弛症患者的面部老化具有以下特点:1）全颜面皮肤弹性减退;2）面部松弛下垂，以颊部、颏部最明显，颞部次之，额部略好;3）面中部皮肤及软组织松垂严重并牵拉双侧外眦下垂，鼻尖塌陷，耳垂长而软，人中沟浅，鼻唇沟、木偶线及颏唇吻明显，唇红薄且唇弓形态萎缩，双侧口角轻度下垂;4）表情肌运动时有运动性皱纹，因面颊部松垂睑颊沟、鼻唇沟明显，但不存在鱼尾纹等静态细纹;5)皮肤牵拉后容易回弹。因此使用浅筋膜多方向悬吊除皱术是较为对症的手段。<br>　　第二部分<br>　　研究一 SD大鼠皮肤弹力蛋白于胚胎后期开始合成，在出生时达到高峰，弹力蛋白的合成期持续整个乳鼠时期。弹力蛋白表达量的高峰期与弹力纤维数量的高峰期不一致，弹力纤维数量的高峰期在出生后1周达到高峰，此后缓慢增长，1成年后有缓慢下降的倾向，但高水平数量可维持至老年时期。弹力纤维异常模型的干预时间以出生后至2周内为佳。<br>　　研究二在弹力纤维合成时期皮内注射青霉胺可以干扰弹力纤维的合成。青霉胺通过趋铜作用阻断赖氨酰氧化酶，阻碍弹力蛋白的交联作用，影响弹力纤维正常形态形成。受到干扰弹力纤维数量减少，但弹力蛋白的表达受负反馈作用增加。通过青霉胺皮、内注射制作动物模型时间成本较高，青霉胺有毒性，需一定的经验来掌握注射剂量，因此该方法制作动物模型的经济性和可行性有待进一步验证。