摘要目的:<br> 构建小鼠IFN-ε蛋白的原核表达质粒,诱导表达和纯化后获得稳定的可溶性重组蛋白并验证其生物学活性。建立绝经后泌尿系感染的小鼠模型,观察IFN-ε对其治疗作用。<br> 方法:<br> 1.将目的基因克隆到表达载体pET28a-SUMO,和能同时表达三个分子伴侣groES、groEL和tig的质粒pG-tf2一起转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IP TG)诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析柱、Desalting柱、Q-HP柱及Superdex75分子筛层析经行纯化后,用Ulp1酶切,并对目标蛋白进行质谱分析。对目标蛋白抑制肿瘤细胞增长活性,刺激细胞产生抗病毒蛋白的活性进行了鉴定。<br> 2.选取ICR雌性健康小鼠分为两组,去势组和假手术组,并通过雌激素测定、阴道涂片的方法验证去势效果。用50μ1UPEC对去势小鼠进行膀胱灌注,建立绝经后泌尿系感染的小鼠模型,24小时后处死小鼠,收集膀胱和尿液标本,将膀胱分为两部分,一部分和尿液标本一起进行细菌培养,另一部分常规病理切片,观察结果。按照上述方法建立绝经后泌尿系感染小鼠模型,分为去势感染组和去势感染治疗组,治疗组分别在模型制作后的第一天、第四天和第七天灌注小鼠IFN-ε(0.8mg/ml,50μl),最后一次灌注结束24小时后处死小鼠,收集其尿液和膀胱标本,膀胱标本分为两部分,一部分ELISA检测炎症因子,另一部分常规病理切片。观察小鼠IFN-ε对绝经后泌尿系感染的治疗作用。<br> 结果:<br> 1.成功构建了重组质粒pET28a-SUMO-IFN-ε,和分子伴侣共表达获得较多可溶性蛋白。目标蛋白酶切后仍可溶,SDS-PAGE分析显示重组IFN-ε蛋白相对分子质量为22000。质谱分析证实目标蛋白的序列和小鼠IFN-ε的序列吻合。小鼠IFN-ε能够抑制肿瘤细胞的生长并能诱导细胞产生抗病毒蛋白MxA。<br> 2.成功制作绝经泌尿系感染小鼠模型。小鼠IFN-ε对于绝经后泌尿系感染的小鼠膀胱组织中的炎性因子IL-5的表达有抑制作用,对于UPEC致损的小鼠膀胱有一定的修复作用。<br> 结论:<br> 1.小鼠IFN-ε蛋白可以和分子伴侣一起在原核系统中以可溶形式表达,并证明了此蛋白具有生活学活性。<br> 2.小鼠IFN-ε对绝经后泌尿系感染小鼠的膀胱组织有一定的治疗作用。
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