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摘要目的:研究木犀草素对小鼠睾丸支持细胞(TM4)氧化应激损伤的保护作用及机制，并通过代谢组学结合分子生物学技术分析细胞内代谢网络及核转录因子Nrf2信号通路变化，为木犀草素用于治疗睾丸组织氧化应激损伤提供实验基础。<br>　　方法:(1)以H2O2作为诱导剂建立小鼠睾丸支持细胞氧化应激损伤模型，采用MTT法检测细胞活力、AnnexinⅤ-PI双染检测细胞凋亡率、JC-1检测线粒体膜电位、DCFH-DA探针法检测细胞内ROS来评价该模型是否建立成功;(2)木犀草素干预H2O2诱导的睾丸支持细胞模型，使用细胞活力检测、细胞凋亡率检测、线粒体膜电位检测、ROS检测等技术评价其氧化作用效果，并使用蛋白免疫印迹法(Western Not)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫荧光法探讨其作用机理;(3)建立和验证一种基于GC-MS技术检测睾丸支持细胞代谢物的分析方法，并使用该技术进行了H2O2诱导睾丸支持细胞氧化应激损伤模型以及木犀草素干预保护的代谢组学分析。<br>　　结果:(1) H2O2能显著抑制TM4细胞的增殖，并呈现时间和浓度依赖性。随着H2O2剂量的升高，细胞的凋亡率上升、线粒体膜电位下降以及ROS水平升高，说明H2O2能够成功诱导TM4细胞发生氧化应激损伤凋亡，并确立了TM4细胞氧化应激模型中H2O2干预的浓度和时间分别为600μmol/L、2h;(2)木犀草素能够促进Nrf2核转位、增强核内Nrf2蛋白表达，上调抗氧化酶HO-1、NQO1、GCLc和GSTA mRNA水平，抑制H2O2诱导的TM4细胞ROS的上升，抑制细胞凋亡、增强细胞活力。(3) H2O2能够引起TM4细胞代谢变化，包括缬氨酸、正缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸、阿拉伯糖、果糖和胆固醇等在内的14种代谢物出现显著性差异;木犀草素干预后，部分由H2O2引起的代谢物变化不同程度的向正常水平靠近，包括缬氨酸、正缬氨酸、谷氨酸、阿拉伯糖和果糖等。<br>　　结论:木犀草素能够激活细胞Nrf2关键因子、促进Nrf2核转位，上调抗氧化酶基因表达，提高其抗氧化功能，逆转H2O2导致的小鼠睾丸支持细胞氧化损伤，发挥保护作用。同时木犀草素能够逆转差异代谢物的水平，影响TM4细胞氨基酸代谢、糖类代谢和能量代谢等相关通路，细胞内小分子代谢物变化与TM4细胞氧化应激损伤及木犀草素抗氧化应激效应密切相关。