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摘要口腔癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，且发病率呈上升趋势。尽管近年来在诊断技术、外科手术以及放疗化疗方面取得进步，但5年总体生存率仍然徘徊在50％左右，伴淋巴结转移者仅有30％左右，而早期癌以及局灶癌的5年生存率可达80％。可见，口腔癌的早期诊断和早期治疗可以大大提高患者五年生存率和生活质量，实现口腔癌的早期诊断至关重要。<br>　　目的：本研究通过对伴有轻-中度异常增生患者的组织进行p16甲基化和羟甲基化检测，与其随访结果相比对，旨在探讨p16基因在口腔癌前病变中的羟甲基化状态与癌变的相关性，以确定p16羟甲基化在口腔癌早期诊断中的应用价值，从而改善口腔癌预后。<br>　　方怯：收集2010年2月至2015年4月北京口腔医院病理诊断为口腔白斑伴鳞状上皮轻到中度异常增生的患者，经一定条件筛选，最后得到90例，其中伴轻度异常增生者65例，伴中度异常增生者25例。记录患者信息，包括病损情况、吸烟史、饮酒史、槟榔咀嚼史、全身病史及用药史等。对病损组织进行石蜡包埋，再予组织切片，编号后进行组织中p16基因（羟）甲基化状态检测，我们运用TET蛋白辅助的重亚硫酸氢盐修饰法(TAB-seq)，通过糖基化保护将5hmC转化为5gmC不参与氧化反应，在后面的氧化过程中，5mC转化为5caC，再由碱基切除修复使5C和5caC均变为胸腺嘧啶T，由此将5hmC和5mC区分开来，再行样本中胞嘧啶(5gmC)测定即完成5hmC检测。同时，临床上开始以3～6个月为一周期进行患者随访，每次复诊记录患者病情变化，收集口内照片，随访为期三年左右。最后，将患者癌变情况予以统计，对照最初的p16基因（羟）甲基化状态，统计数据，分析结果。<br>　　结果：经过平均41.38个月的随访（随访率为85.6％），最终全组77例病例中癌变率11.7％，伴羟甲基化的p16甲基化组中癌变率(40％)，明显高于不伴羟甲基化的p16甲基化组(7.7％)和p16甲基化阴性组(7.4％)。P16甲基化和羟甲基化组合分析癌变预测敏感性为80％，特异性为66.7％。与p16甲基化阴性组比较，伴羟甲基化的p16甲基化组在年龄、性别等各个小分组中的癌变率和相对危险度均更高，随访终点无进展生存率也明显更低(p=0.042)，但是不伴羟甲基化的p16甲基化组在这些方面与阴性组比较则无明显统计学差异（无进展生存率比较p=0.055）。<br>　　讨论：一直以来有关甲基化的研究往往未排除羟甲基化干扰，传统检测方法无法区分5mC和5hmC，本研究采用糖基化保护法最终将5mC和5hmC区分开来，得到p16羟甲基化分析结果。从p16基因启动子甲基化阳性结果中区分出羟甲基化之后，我们发现是羟甲基化的存在使甲基化的预测有效。且结合羟甲基化组分析后，预测敏感性也明显提高，但是特异性和阳性预测值都不够理想，假阳性率也较高，实现临床应用前还有待进一步研究。基于本实验结果，我们可以推测p16基因启动子羟甲基化很大程度上承担了甲基化的口腔癌癌变预测功能。在多因素分析中，p16甲基化率、羟甲基化率和癌变率都是随着组织异常增生的程度增加而升高，舌部的明显较其他部位更高，而不吸烟者较吸烟者更高。<br>　　结论：p16羟甲基化有希望成为重要的癌变预测标志物之一，协同甚至超越甲基化分析，帮助实现口腔癌的早期诊断。