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摘要前列腺癌(prostate，PCa)是常见的男性泌尿系统恶性肿瘤，在欧美国家的男性恶性肿瘤中，其发病率位居首位，死亡率位居第二。近年来，由于饮食结构的改变，老年男性平均寿命的增加，环境污染及人们生活压力逐渐增大，我国前列腺癌的发病率也在逐年升高。骨骼是其最易转移的部位之一，有超过80％的患者最终都会有骨转移的发生，大约30％～50％的患者在初诊时即有骨转移的发生，并且骨转移会出现严重的骨痛、病理学骨折、神经压迫等各种并发症，严重降低了患者的生活质量。<br>　　近年来，随着现代医学模式向生物-心理-社会模式的转换，心理因素对疾病的作用越来越得到更多人的重视，尤其对于前列腺癌等恶性肿瘤患者，由于对癌症的惧怕及高昂的治疗费用，在漫长的诊疗过程中，患者总是被不同程度的精神心理压力所困扰。一些不良情绪如长期的紧张、焦虑、抑郁等，使患者处于一种长期的慢性心理应激状态。现代医学研究表明，慢性心理应激通过交感-肾上腺髓质系统(sympatho-adrenomedullary system,SAMS)及下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(hyp othalamic-pituitary-adrenal axis，HPA)，调节体内儿茶酚胺类物质分泌，从而促进体内细胞因子的分泌，调节机体的免疫，对前列腺癌的发生发展产生一定的影响。<br>　　研究表明，白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)对许多肿瘤（如乳腺癌、卵巢癌和胃癌等）的发生发展具有重要作用，其对前列腺癌细胞的增殖转移等作用也已被大量研究所证实。然而慢性心理应激是如何调控IL-6的表达，是通过什么信号通路调控IL-6的表达？这些问题目前尚不是十分清楚。<br>　　目的：<br>　　体外培养人前列腺癌细胞，分别从基因水平和蛋白水平揭示儿茶酚胺类物质（异丙肾上腺素等）调控IL-6表达的信号通路;建立一种新颖的、使前列腺癌细胞特异性向骨骼转移的动物模型;通过束缚、摇晃等方法建立一种慢性心理应激动物模型，通过小鼠探索慢性心理应激对IL-6的表达影响，并对前列腺癌骨转移影响，为前列腺癌的临床综合治疗提供思路和方法。<br>　　方法：<br>　　本研究分为两部分：(1)体外培养人前列腺癌细胞PC3，将同一培养瓶中的细胞均匀接种到六孔板内，用异丙肾上腺素(Isoprenaline，ISO)和去甲肾上腺素(Norepinephrine，NE)处理不同时间后收取细胞，提取总RNA，通过实时荧光定量核酸扩增检(Real-time quantitative PCR，qPCR)IL-6表达，然后使用不同信号通路抑制剂预处理前列腺癌细胞，随后检测其表达是否发生变化，从转录水平揭示儿茶酚胺调控IL-6表达的信号通路;Western blot检测信号通路蛋白表达，从翻译水平揭示儿茶酚胺调控IL-6表达的信号通路;(2)通过股动脉注射建立骨转移小鼠模型，然后通过束缚、摇晃，湿润垫料等方法建立慢性心理应激小鼠模型。实验分为四组：A.对照组(control);B.应激组(stress);C.腹腔注射异丙肾上腺素组(ISO);D.应激加腹腔注射普萘洛尔组(stress+Pro)。股动脉注射前列腺癌细胞后三周，在活体状态下，对小鼠眼眶取血，通过酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测离心后的小鼠血清中IL-6含量，统计分析结果;随后处死小鼠，将注射前列腺癌细胞侧的下肢骨取出，多聚甲醛（4％，中性）固定24h，脱钙15天，石蜡包埋、切片，抗酒石酸酸性磷酸酶染色(Tartrate resistant acid phosphatase，TRAP)染色，统计分析不同组别间的破骨细胞数量，苏木素-伊红染色(Hematoxylin and Eosin,HE)染色，观察统计不同分组间的肿瘤所占面积大小，所有实验结果由统计分析软件SPSS17.0比较各组间差异。<br>　　结果：<br>　　1.ISO和NE均能使IL-6表达明显上调(P＜0.05），当使用Propranolol（非选择性β-受体阻断剂）和ICI118551（β2-AR特异性阻滞剂）预处理前列腺癌细胞后，IL-6表达明显下调(P＜0.05），而用阿替洛尔(Atenolol，ATEN，β1-AR阻滞剂)预处理前列腺癌细胞后其表达未发生明显变化(P＞0.05)，WP1066(STAT3抑制剂)和PD184352(ERK抑制剂)预处理后，IL-6表达无明显变化(P＞0.05);而H89(AKT抑制剂)及GDC0941(PKA抑制剂）预处理前列腺癌细胞后，IL-6表达均明显下降(P＜0.05);Western blot结果显示，异丙肾上腺素使P-AKT抗体蛋白表达明显上调(P＜0.05)，当使用非选择性β受体阻滞剂普萘洛尔、β2受体阻断剂ICI118551预处理前列腺癌细胞后，其表达则出现明显下降(P＜0.05)，使用PKA抑制剂GDC0941预处理前列腺癌细胞后，其表达亦明显下调(P＜0.05)。<br>　　2.TRAP染色结果显示，与对照组比较，腹腔注射ISO组小鼠下肢骨中破骨细胞数量明显增多(P＜0.05），应激组与腹腔注射ISO组间的结果类似，且两组之间无明显差异(P＞0.05);与应激组比较，而应激加腹腔注射普萘洛尔组破骨细胞数量明显减少(P＜0.05);HE染色发现，与对照组相比，应激和腹腔注射ISO组小鼠下肢骨中肿瘤细胞面积明显增大(P＜0.05）;而两组之间无明显差异;与应激组相比，应激加腹腔注射普萘洛尔组肿瘤面积明显减小(P＜0.05);ELISA检测发现，与对照组比较，腹腔注射ISO组小鼠血清中IL-6含量明显增加(P＜0.05），应激组结果与之类似，且两组间无明显差异(P＞0.05);与应激组比较，应激加腹腔注射普萘洛尔组IL-6含量明显降低(P＜0.05)。<br>　　结论：<br>　　1.异丙肾上腺素可上调前列腺癌细胞IL-6的表达，通过β2-AR-AKT-PKA信号通路调控其表达;<br>　　2.股动脉注射法建立的前列腺癌骨转移动物模型，转移成功率较高，特异性地转移至小鼠下肢骨，避免了除骨之外的其他远处转移造成的干扰，为我们研究前列腺癌骨转移机制提供了有利条件。<br>　　3.慢性心理应激加速白细胞介素6等细胞因子的分泌。<br>　　4.慢性应激使破骨细胞数量增加，打破骨代谢平衡，使骨质溶解，从而促进前列腺癌的骨转移。