检索历史 清除

摘要顺铂作为第一代铂药被广泛地应用于临床上治疗各种实体肿瘤，例如，睾丸癌和卵巢癌等。然而，顺铂在治疗疾病的同时，也伴随着严重的毒副作用，如肾毒素和耳毒素等。目前的研究表明，顺铂与一些生物分子（蛋白质等）的相互作用是引起顺铂毒副作用的主要原因之一。因此，研究顺铂和生物分子的相互作用对深入了解顺铂的毒副作用机制具有非常重要的意义。<br>　　本论文利用电喷雾质谱技术结合蛋白质组方法，深入研究了顺铂和蛋白质（肌红蛋白、抑肽酶蛋白）、小肽（朊病毒肽PrP106-126）以及二十种必需氨基酸之间的相互作用机制。<br>　　建立了顺铂和肌红蛋白的相互作用研究的电喷雾质谱方法。结果表明，顺铂和肌红蛋白相互作用的主要一加合产物为Myo-Pt(NH3)2。利用串联质谱技术，发现了顺铂在肌红蛋白上的五个结合位点（Trp14、His64、His81、His113和His116），其中顺铂结合His64可能导致蛋白功能发生改变，而且顺铂的结合会扰乱肌红蛋白分子结构使其展开。所建立的基于限制性酶解的ESI-MS方法为监控顺铂诱导蛋白构象改变提供了简捷的分析方法。<br>　　利用ESI MS详细地研究了顺铂和抑肽酶蛋白的相互作用。其主要的一加合产物为Apr-Pt(NH3)2Cl、Apr-Pt(NH3)Cl和Apr-Pt(NH3)2，并提出可能的反应路径。没有观察到氧化态的蛋白与顺铂之间的反应。利用Top-down串联质谱方法直接确定了顺铂在蛋白上的结合位点Cys5和Met52（或Cys51），无需复杂的样品处理。<br>　　采用ESI MS研究顺铂和朊病毒肽PrP106-126在纯水中结合反应，观察到两者反应产生的一加合物、二加合物、三加合物和四加合物，提出了顺铂和朊病毒肽PrP106-126反应的可能路径，顺铂和朊病毒肽PrP106-126的反应受到反式效应的影响。<br>　　利用ESI MS详细地研究顺铂和二十种必需氨基酸的相互作用。研究结果表明，顺铂和氨基酸在水溶液中易形成稳定的螯合物，而且氨基酸结构以及溶液的pH值对于顺铂和氨基酸的反应有着重要的影响。同时利用串联质谱技术，探讨了纯水中氨基酸的侧链、α-氨基、α-羧基对顺铂的亲和性，氨基酸结构的差异导致了其对顺铂亲和性的不同。<br>　　本论文利用电喷雾质谱技术系统地研究了顺铂与蛋白质、小肽、氨基酸相互作用，不仅有助于认识顺铂在体内的运输、摄取等过程，而且对于深入理解顺铂的毒副作用有着重要意义。