检索历史 清除

摘要背景：<br>　　近年来，随着人们生活节奏的加快，生态环境的变化，各类肿瘤的发生率也在不断升高，女性恶性肿瘤患者也在近年来显著增多。随着现代医学技术的快速发展，临床对肿瘤的治疗取得了显著成效，显著延长了肿瘤患者的生存期，改善了生活质量，但对于女性恶性肿瘤患者而言，由于放疗、化疗等治疗手段可造成卵巢组织的损伤，影响其功能。因此女性恶性肿瘤患者治疗后，其生育功能往往受到严重的影响，部分患者甚至丧失生育能力。其中最为常见的相关不良结局为卵巢早衰，卵巢早衰（premature ovarian failure，POF）是指女性在40岁之前出现卵巢功能衰退，出现诸如闭经、雌激素水平降低以及促性腺激素水平升高在内的一组疾病。POF的发生可使患者出现月经紊乱、部分患者甚至出现闭经，进而导致机体雌激素水平降低，引起心血管系统多种疾病发生的风险增加，部分患者可发生骨质疏松，对女性的生活质量产生严重的不良影响。卵巢早衰的治疗在生殖医学中一直是难以解决的难题，目前常用的治疗方法包括激素替代、低温保卵、卵巢移植以及免疫治疗，同时也有学者采用心理疗法进行治疗。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)具有促进内皮细胞增值，促进血管生成的作用。在短尾猴卵巢自体移植的研究中发现卵巢移植后使用VEGF比不使用VEGF激素水平高，且差异具有统计学意义。由此可知，VEGF在促进移植后卵巢组织恢复上有重要意义。本研究以雌性大鼠为研究对象，将新鲜卵巢组织自体异位移植，然后使用VEGF进行干预，观察移植大鼠的卵巢组织学变化，计算卵泡存活数、卵巢组织移植数和回收率，检测各组大鼠血液中雌二醇(E2)水平，分析血管内皮生长因子对大鼠卵巢组织自体移植的影响，为临床应用提供依据。<br>　　目的：<br>　　探讨血管内皮生长因子(VEGF)对大鼠卵巢组织自体移植的影响。<br>　　方法：<br>　　未经交配雌性SD大鼠60只，48只先进行摘除卵巢去势手术，随后再进行卵巢组织自体移植（按移植部位及卵巢处理方式不同随机分为A、B、C、D四组，每组12只），另12只不作任何处理的大鼠作为对照组。A和B组均采用肾被膜下移植，A组移植新鲜切除的卵巢组织，B组移植的卵巢组织先放入含0.1μgVEGF的5mL PBS中，在常温下浸泡20min后再行移植。C和D组均采用颈部皮下移植，C组移植新鲜切除的卵巢组织，D组移植的卵巢组织先放入含0.1μgVEGF的5mL PBS中，在常温下浸泡20min后再行移植。移植术后第1天，对B组和D组大鼠连续3天尾静脉部位注射VEGF0.3μg，A组和C组连续3天注射等量的生理盐水。各组大鼠术后均给予青霉素腹腔注射（15万U/只），1次/d，共3d。各组移植14天后肌注一次尿促性素(HMG)，剂量为10单位/只。对照组大鼠正常饲养14天后肌注一次HMG，剂量为10单位/只。<br>　　卵巢移植后同时记录各组大鼠生存情况、动情周期恢复情况等指标，在移植2周后处死大鼠并取出移植卵巢组织，采用组织学方法观察卵巢组织内卵泡形成情况和血管生成情况，同时测定大鼠静脉血清内雌二醇(E2)水平。此外，将对照组大鼠处死后无菌取其卵巢组织用于离体培养，随机分为两组，每组5个卵巢，分别使用不含VEFG的细胞培养液（Ⅰ组）和含有VEFG细胞培养液（Ⅱ组），培养2周后检测各组卵巢细胞和卵泡细胞存活情况。<br>　　结果：<br>　　(1)各移植组大鼠卵巢移植术后生存情况:移植术后，肾被膜下A组有3只大鼠死亡，B组有2只大鼠死亡，颈部皮下C组有2只大鼠死亡，D组和对照组无大鼠死亡。<br>　　(2)各组大鼠卵巢组织回收情况的比较:术后存活大鼠移植部位卵巢组织回收，肾被膜下移植+VEGF组（B组）大鼠卵巢组织回收率高于肾被膜下移植组（A组），颈部皮下移植+VEGF组（D组）大鼠卵巢组织回收率高于颈部皮下移植组（C组），但差异均无统计学意义(P＞0.05)。<br>　　(3)移植卵巢形态学变化:肉眼观察可见移植组大鼠卵巢移植体体积均明显增大，呈圆形或肾形凸起，移植体表面可观察到大量新形成的血管;组织学观察移植2周后，各移植组均可看到圆形的卵母细胞和新生血管。肾被膜皮下移植+VEGF组（B组）和颈部皮下移植+VEGF组（D组）卵巢组与未使用VEGF的A组和C组比较，前者的新生血管明显多于后者，且成簇分布。<br>　　(4)各组大鼠卵巢组织中卵泡存活情况比较:肾被膜皮下移植+VEGF组（B组）的卵泡细胞显著大于肾被膜下移植组（A组）卵泡细胞数（15.41±0.38/HPF VS.13.25±0.47/HPF），差异有统计学意义(P＜0.05)。颈部皮下移植+VEGF组（D组）的卵泡细胞显著大于颈部皮下移植组（C组）卵泡细胞数（12.07±0.14/HPF VS.11.22±0.18/HPF），差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　(5)大鼠移植后动情周期的比较:肾被膜下移植组（A组）9只大鼠中动情周期出现率为55.56％，肾被膜皮下移植+VEGF组（B组）10只大鼠中动情周期出现率为80.00％，后者明显高于A组，差异具有统计学意义(P＜0.05);颈部皮下移植组（C组）10只大鼠中动情周期出现率为50.00％，颈部皮下移植+VEGF组（D组）12只大鼠中动情周期出现率为75.00％，也明显高于C组，差异具有统计学意义(P＜0.05)，上述4组大鼠卵巢移植后动情周期持续时间差异无统计学意义(P＞0.05)。<br>　　(6)各组大鼠移植2周后静脉血内雌二醇(E2)水平的比较:移植后2周A、B、C和D四组大鼠E2水平均显著低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05);B组大鼠E2水平高于A组，D组大鼠E2水平高于C组。<br>　　(7)卵巢细胞VEGF作用下的离体实验:在含有VEGF的Ⅱ组(α-MEM+ITS+10％HAS+VEGF)培养液中卵泡细胞存活数明显高于不含有VEGF的Ⅰ组（α-MEM+ITS+10％HAS），且差异具有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　结论：<br>　　血管内皮生长因子(VEGF)可促进卵巢移植后血管的生成，提高移植后卵巢组织中卵泡数量和存活率，有助于大鼠卵巢移植后动情周期的恢复，VEGF的应用可促进卵巢功能的恢复。