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摘要糖尿病是一种通常伴随有多种致死并发症的慢性代谢疾病。其在全球尤其是发展中国家的高发病率使得该病的即时诊断及监控引起广泛关注。糖化血红蛋白作为糖尿病评估的金标准，可以反映出患者2～3月内的血糖控制水平。目前建立在大型生化分析仪上的糖化血红蛋白的检测方法较多，但为了实现更加灵敏、方便和快速的糖尿病诊断，开发适用于小型体外诊断设备(IVD)上的糖化血红蛋白检测方法非常必要。微流体芯片技术作为近十几年来的研究热点，因其低成本，小型化，易于制造和控制等优点备受关注。因此，在微流体芯片上建立快速检测糖化血红蛋白的新方法，会为相应的即时检测(POCT)产品开发提供新的思路。<br>　　本文旨在阐述微流体芯片上建立快速检测糖化血红蛋白的方法。在绪论部分介绍了糖化血红蛋白的理化性质及生物学特征、硼亲和材判及分子识别以及PMMA微流体测试卡的制造及应用。实验部分的研究工作主要分为以下四个部分:<br>　　(1)含苯硼酸基团的丙烯酸聚合物的合成与表征<br>　　采用羧氨基交联的方法合成丙烯酰胺基苯硼酸和丙烯酰胺基苄胺单体，对单体的分子结构进行了红外光谱表征，对单体合成产率进行了计算。采用可逆链转移加成自由基聚合的方法一锅合成了含有苯硼酸基团的丙烯酸聚合物，为确定聚合物的分子结构，平均分子量和分散度，分别进行了红外光谱，核磁氢谱和凝胶排阻色谱的表征。<br>　　(2)硅基芯片上快速检测糖化血红蛋白<br>　　在旋涂有聚苯乙烯-马来酸酐薄膜的硅基芯片上，共价固定合成的含苯硼酸基团的丙烯酸聚合物，形成硼酸亲和基底。对于包被聚合物时的保湿剂选择，保湿时间，干燥时的环境湿度，干燥时间等条件进行了优化。在基底上利用硼酸亲和识别糖化血红蛋白分子，并与磁颗粒偶联的血红蛋白抗体形成免疫夹心结构。对免疫反应中封闭液的选择，封闭时间，封闭温度，抗原反应温度，抗原反应时间和抗体反应温度等条件进行了优化。在光学显微镜和光学轮廓仪上分别对免疫反应点进行观察，并通过磁颗粒计数法评价免疫反应的程度。建立了两个浓度范围的糖化血红蛋白检测标准曲线，相关系数均大于0.98，检测限达17.7ng ml-1。对硼酸亲和免疫夹心法检测糖化血红蛋白进行了方法学评价，该方法具有良好的重复性，精密度和稳定性。与文献中其他方法相比检测范围广，并且更加快速，准确。<br>　　(3)PMMA微流体测试卡的设计和制作<br>　　对原有PMMA微流体测试卡进行了改进，增加了废液槽与吸水纸结构，增加了测试卡的液体容量，进而适用于分步法检测反应。采用酸催化溶胶凝胶法合成了二氧化硅纳米颗粒，优化了配方中添加分散剂和硅烷试剂的比例。在透射电子显微镜和扫描电子显微镜上分别对合成的二氧化硅纳米颗粒及其涂层进行了观察。对等离子体活化，紫外光照和二氧化硅纳米颗粒涂层三种方式表面亲水化处理PMMA测试卡上盖进行了比较。<br>　　(4)时间分辨荧光微流体测试卡上同步检测血红蛋白和糖化血红蛋白<br>　　优化了测试卡底板上的点样条件。对冲洗液体积，偶联抗体的时间分辨荧光微球体积，偶联抗体时间分辨荧光微球稀释倍数，抗原反应时间和包被抗体浓度等反应条件进行了优化。建立了血红蛋白和糖化血红蛋白同步检测的标准曲线并对该方法进行了方法学评价。