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摘要p70S6K(p70Ribosomal Protein S6Kinase1,p70S6K,S6K1)是Ser/Thr激酶，mTORCl(Mechanistic Target of Rapamycin Complex1)的下游效应分子之一，可以使得核糖体蛋白S6(Ribosomal Protein S6，rpS6，S6)磷酸化，促进蛋白质合成。细胞内外营养及能量环境的变化会影响p70S6K(S6K1)活性，调控蛋白质合成，从而调控细胞代谢和生理状态。RPS5基因产物RPS5蛋白(40S Ribosomal Protein S5)是真核生物核糖体40S小亚基的一个亚单位，在维持翻译准确性上发挥重要作用，可与病毒IRES(Internal Ribosome Entry Site)相互作用，在介导与IRES相关的翻译起始中具有重要意义。目前对RPS5功能的了解有限，对其与相关激酶的相互作用亦未见报道。<br>　　实验利用pGBKT7-S6K1载体表达诱饵蛋白，筛选pGADT7-cDNA文库，发现与p70S6K(S6K1)相互作用蛋白并对其编码基因测序，进而从鉴定得到的基因中挑选功能尚不清楚的RPS5基因产物进行免疫共沉淀验证。RT-PCR克隆RPS5基因并构建过表达载体pIRES2-EGFP-RPS5和靶向RPS5基因RNA干扰载体pRNAT-U6.1/Neo-RPS5-shRNA，转染绒山羊胎儿成纤维细胞，MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期。<br>　　结果表明:1）含pGBKT7-S6K1质粒的Y2H酵母菌和含pGADT7-cDNA质粒的Y187酵母菌进行酵母双杂交后，通过四轮缺陷平板及抗生素筛选，得到27株酵母;2）得到的含有pGADT7-未知蛋白cDNA的27株Y2H酵母分别与pGBKT7-S6K1做一对一转化实验，确认的阳性克隆送出去测序，序列分析得到Ribosomal Protein S5(RPS5),Musimon Chromosome3Open Reading Frame(C3H12orf75),Ornithine Decarboxylase Ant Izyme1(OAZl),Secreted Protein,Acidic,Cysteine-Rich(SPARC),Eukaryotic Translation Initiation Factor1-Like Pseudogene(LOC100300942)和ER Membrane Protein Complex Subunit8（EMC8）等6个基因;3）选择我们认为重要且功能不清楚的RPS5，通过免疫共沉淀再次验证，表明RPS5与p70S6K(S6K1)具有相互作用关系。RPS5可能是p70S6K(S6K1)一个新的作用靶;4）RPS5基因ORF全长615bp，编码204个氨基酸残基。过表达RPS5基因促进细胞增殖(p＜0.05)和细胞周期进程;5）转录后沉默RPS5，抑制细胞增殖(p＜0.05)和细胞周期进程。<br>　　本文利用酵母双杂交技术筛选出S6K1相关蛋白6个，对其中RPS5功能进行了初步的探究，表明RPS5对GFb增殖和细胞周期具有明显的调控作用。p70S6K(S6K1)与RPS5间相互作用关系为我们以后研究氨基酸信号转导的分子机制提供了条件。