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摘要作为重要的Hedgehog通路相应蛋白，转移消失蛋白(Missing in Metastasis，MIM)参与细胞膜的调控过程，因为它在肿瘤中异常表达，近年来受到越来越多的关注。MIM蛋白的最重要的结构特征是含有Inverse Bin-Amphiphysin-Rvs(I-BAR)结构域，此结构域在体内可以使MIM蛋白二聚化，并且与细胞膜形态的调节，肌动蛋白以及Rac蛋白的结合相关。之前有相关的报道揭示了MIM二聚体参与细胞内吞作用和丝状伪足的形成等过程的调控。可以看出I-BAR结构域及其介导的二聚化对于MIM蛋白的功能至关重要。纯化后的MIM-I-BAR蛋白可用于研究与MIM结合的生物大分子、进行相关药物的设计与筛选、以及MIM-I-BAR蛋白对磷腊膜的作用研究，而纯化出高浓度的蛋白至关重要。<br>　　在纳米尺度上，原子力显微镜(Atomic force microscope，AFM)可以实现各种不同的样品（如导体以及不导电的组织、有机材料、生物材料等绝缘体）的成像，并且能够测量不同分子之间的相互作用力。在蛋白质的研究中，AFM能够提供大量的信息。它不仅能够提供形象的3D图像，用来蛋白质形态与空间结构的观察;还可以用来研究蛋白质与核酸、蛋白质与蛋白质等大分子之间的相互作用，进一步测量出分子之间的相互作用力。此外AFM温和的样品处理方式避免了观测过程中样品的变性。AFM的这些优点使得其可用于指导蛋白纯化过程的优化。在本文的研究中通过AFM指导优化了MIM-I-BAR蛋白的纯化过程，并对纯化后蛋白进行质谱检测和形貌观察。<br>　　本文内容具体来说，主要包括以下几个方面的工作:<br>　　1)通过Ni-NTA柱纯化了6×His标记的MIM-I-BAR蛋白。通过优化纯化过程（包括改变细胞裂解条件和蛋白质洗脱的条件），成功地提高了蛋白的溶解度。通过后续的脱盐超滤步骤，得到了纯度高达90％的MIM-I-BAR蛋白。<br>　　2)创新性地提出引用AFM观察每个纯化步骤对于产物的影响。相比于传统的蛋白纯化评估手段，如SDS-PAGE及质谱色谱，高分辨率AFM提供更多的视觉图像，确保我们可以观察到每个纯化过程前后MIM-I-BAR蛋白所处微环境的明显变化。结合分子动力学模拟分析观测到的结构，强调了在蛋白纯化过程中去除高浓度咪唑的重要性，对后续的蛋白纯化的指导具有重大意义。<br>　　3)文章最后，我们的用二级质谱检测纯化的最终产物MIM-I-BAR蛋白，并采用原子力显微镜进行MIM-I-BAR蛋白的形貌观察。将二级质谱检测结果和蛋白质数据库相比对，结果显示质谱结果与数据库中MIM-I-BAR序列基本是吻合的。使用AFM在云母表面观察到具有两种不同尺寸的MIM-I-BAR蛋白。结合分子动力学模拟出蛋白的3D图像，这些分子分别显示为MIM-I-BAR单体和二聚体。