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摘要本文主要包括链霉菌（一种放线菌）SH-62中羊毛硫抗生素生物合成基因簇的异源表达和中断以及雷纳霉素类似物生物合成基因簇中关键基因的敲除这两部分的内容:<br>　　一、链霉菌SH-62中羊毛硫抗生素生物合成基因簇的研究<br>　　羊毛硫抗生素是革兰氏阳性菌产生的，具有良好的抗革兰氏阳性菌的活性。有些羊毛硫抗生素还展现出潜在的抗肿瘤、抗病毒能力，具有较高的研究价值。在链霉菌SH-62的基因组中发现了一个潜在的羊毛硫抗生素生物合成基因簇（命名为lah）。为了研究lah基因簇的功能，本研究将包含有完整lah基因簇的4个BAC质粒15H2、21C4、21D6和21D7通过接合转移转入S.lividans ZX1和S.lividans ZAY3中，获得异源表达菌株。生物活性测定发现以S.lividans ZX1为宿主的异源表达菌株具有抗革兰氏阳性菌的能力，但是在敲除了放线紫红素、十一烷基灵菌红素和钙依赖型抗生素合成基因簇的异源宿主S.lividans ZAY3中lah基因簇没有产生抑菌活性物质。推测是阳性BAC质粒上其它的基因激发了宿主S.lividans ZX1中原本沉默的抗生素合成基因簇的表达。<br>　　为了激活并提高lah基因簇的表达，将lah基因簇中所有关键的合成酶基因克隆到高拷贝的链霉菌自主复制型载体中，并安装了强启动子，构建出超表达质粒。并且将His-tag标签融合到lahA基因的C端，以便后期目标多肽化合物的纯化。<br>　　同时，在原产生菌链霉菌SH-62中，成功构建了脱水酶基因lahB的中断菌株和用于敲除前体肽合成酶基因lahA的质粒，后续基因敲除突变菌株的筛选正在进行中。<br>　　二、链霉菌SH-62中雷纳霉素类似物生物合成基因簇的研究<br>　　雷纳霉素(leinamycin，LNM)是具有抗癌作用的一种大环内酯类抗生素，具有重要的临床价值。生物信息学分析发现链霉菌SH-62的基因组中有一个与LNM生物合成基因簇相似度很高的次级代谢产物合成基因簇（命名为lem），有表达出类似于雷纳霉素的次级代谢产物的可能。本研究对lem基因簇的异源表达菌株进行了生物活性测定和HPLC检测，证实有少量的抑菌活性物质产生，但未检测到异源表达产物的特征吸收峰，推测可能是因为异源表达产物的含量较低。<br>　　同时通过同源重组双交换的方法，成功地在SH-62中敲除了lem基因簇中的关键合成酶基因lemL。目前通过TLC和HPLC分析尚未检测到野生型菌株SH-62和敲除突变菌株SH-62△lemL的代谢产物差异，后期需要进行更加细致的代谢物分析。