换一批
换一批摘要通过对培养基成份、菌丝体培养时间、胞壁溶解酶系统、渗透压稳定剂的种类和浓度等条件对原生质体形成的影响的,确立了产黄青霉(Penicillium chrysognum)H106原生质体制备的最适条件:用构巢曲霉三磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子PgpdA和顶头孢霉异青霉素N合成酶基因启动子PpcbC分别构建了二种由不同启动子引导的透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)基因表达质粒pVHbM和pVHbI.将表达质粒pVHbM,pVHbI和含有选择标记amds基因的质粒pUCamds共转化产黄青霉,在以乙酰胺为唯一氮源的选择培养基上筛选出56株转化子.DNA点杂交证实了有18株整合有vhb基因,共转化率为32﹪.对整合有vhb基因的转化子的CO-VHb吸收光谱分析表明,有8个转化子在420nm处有VHb蛋白吸收峰.证明在这些转化子中产生了有功能的透明颤菌血红蛋白.青霉素摇瓶发酵结果证明,VHb的表达可促进青霉素的合成.整合有vhb基因的转化子菌株的青霉素产量比对照株增加了约10﹪-50﹪.
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