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摘要成体干细胞源肝细胞为肝病的治疗提供了新思路，其中种子细胞的获得和肝功能重塑是关键环节。目前对于不同成体干细胞成功诱导功能性肝细胞的报道很多，但诱导的低效性大大限制了其临床应用。小涎腺同属消化道腺体，具有来源广泛，取材方便与供区损伤小的优点，是非常理想的成体干细胞来源，具有巨大的研究价值和应用潜力。此外，我课题组进行人小涎腺干细胞研究时发现，人小涎腺间充质干细胞（hMSG-MSCs）表达较多肝细胞相关蛋白，提示hMSG-MSCs可能成为体外快速获得功能性肝细胞的种子细胞。利用人小涎腺间充质干细胞进行快速体外成肝诱导，将为肝病细胞治疗提供理论基础和技术支持。<br>　　目的：<br>　　1.从人小涎腺组织分离获得间充质干细胞，对hMSG-MSCs进行鉴定，为体外快速成肝诱导做干细胞源基础。<br>　　2.对hMSG-MSCs进行快速体外成肝诱导，并鉴定诱导细胞相关基因和蛋白表型，检测最终诱导获得细胞是否具有成熟肝脏细胞相关功能。<br>　　方法：<br>　　1.对人小涎腺组织进行原代培养，从中分离培养出间充质干细胞，体外传代扩增。利用流式细胞仪对获得细胞进行表型鉴定，并进行成骨成脂分化诱导。<br>　　2.在体外二维培养环境下，通过三步法利用CHIR99021、HGF、FGF4、EGF等细胞诱导因子对hMSG-MSCs进行快速成肝诱导，观察诱导过程中细胞状态及形态变化，利用Real-time PCR及免疫荧光检测诱导细胞相关表型的表达，并通过PAS染色和ICG摄取检测最终诱导获得细胞相关成熟肝脏细胞功能。<br>　　结果：<br>　　1.从人小涎腺组织块中成功分离培养获得hMSG-MSCs，该细胞呈纺锤样（长梭形），体外增殖迅速，且其细胞特性保存完整。细胞流式分析表明，获得的hMSG-MSCs表达CD29、CD90和CD166等间充质干细胞标记物，不表达CD117、CD45等造血干细胞标记，也不表达CD49f等上皮类细胞标记，并且可成功向骨、脂肪方向进行分化。<br>　　2.在体外二维培养环境下，三步法hMSG-MSCs体外成肝诱导共用时6天。诱导第一天后，80％-90％的细胞形态由长梭形变为短梭形;第二天后细胞形态变为多角形，第六天后最终变为类肝细胞形态。Real-time PCR显示，内胚系祖细胞标志物FOXA2、SOX17及新生肝细胞标志物AFP先升高后降低，成熟肝细胞标志物ALB、CYP3A4和AAT持续升高。免疫荧光检测不同阶段相关蛋白阳性表达。ICG摄取和PAS染色均为阳性。<br>　　结论：<br>　　1.由人小涎腺组织可分离培养获得hMSG-MSCs，该细胞具有强大自我更新能力和多向分化潜能，可以作为体外快速成肝诱导的种子细胞。<br>　　2hMSG-MSCs在体外二维培养环境下通过三步法6天成肝诱导，最终所获得的细胞为成熟且具有一定功能的肝细胞。