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摘要脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)导致神经元丢失，从而带来损伤部位以下运动和感觉功能的障碍。目前，人们仍未发现有效的治疗SCI的方法。传统的手术和药物治疗只能改善脊髓损伤情况，并不能有效促进脊髓神经和轴突再生。近年来，细胞移植用于脊髓修复治疗被证明可能是一种有效的措施，因为移植的细胞可以分化成神经元以及少突胶质细胞并分泌神经营养因子。研究人员通过细胞移植使神经元与轴突再生形成新的神经元电路来促进脊髓再生，从而恢复脊髓功能。然而，细胞疗法用于脊髓损伤修复同样面临挑战，其中，如何安全、方便地获取大量可移植的神经元细胞是最主要的一个问题。<br>　　在本文中，我们致力于找到一种可大量用于脊髓损伤的理想细胞来源，使得细胞移植更为高效、便捷。最近研究认为293T细胞具有神经前体细胞的特性，而睾丸组织内富含多种神经生长因子，并且其机制细胞具有神经系统细胞的典型marker，大量研究也表明睾丸的免疫豁免使其可以作为良好的组织或细胞移植的受体。因此，我们尝试将293T细胞植入小鼠睾丸，观察其生长与分化，并通过体内与体外实验研究，确定293T细胞可在睾丸内分化为神经元，然后将提取培养的神经元移植到SCI大鼠进行脊髓修复治疗。我们分析了睾丸内293T细胞的迁移、形态、生长以及神经元标志物的表达，发现在7天时移植细胞增殖至遍布睾丸组织，并且人多数细胞在移植后1周发生明显的细胞形态改变，分化为表达神经元核抗原（neuron-specific nuclear protein，NeuN）和beta-Ⅲ型微管蛋白(β-Ⅲ tubulin)的神经元。体外培养实验发现，移植细胞在移植2天与4天时仍可增殖，但在7天时不再增殖，表现出典型神经元的形态特征，胞体饱满，多呈梭形、锥形，少数呈多边形，并出现较明显的椎样结构，同时表达NeuN和β-Ⅲtubulin，这一结果再次证明了293T细胞在睾丸内成功分化为神经元，并且可提取后在体外培养。同时，我们用睾丸匀浆梯度诱导293T细胞的体外实验发现，此时293T细胞持续增值且不表达β-Ⅲ tubulin，即并不能分化为神经元，说明293T细胞的分化需要在睾丸活组织内进行，其过程需要睾丸内部组织微环境的参与。在SCI大鼠模型的治疗实验中，组织学研究显示，293T细胞在睾丸内分化而来的神经元细胞可以取代受损神经细胞，再生出新的神经元，并同时抑制星形胶质细胞在病变部位的增殖，减少瘢痕组织的形成，最终在很大程度上恢复了SCI大鼠后肢的运动功能。<br>　　综上所述，我们通过在鼠睾丸内对293T细胞进行培养分化获得了大量神经元细胞，并且在SCI大鼠的再生治疗中取得了良好效果。这种方法可以高效、便捷、安全地获得大量神经元细胞，用以解决以往细胞移植中细胞来源和数量受限的问题，为脊髓和其它神经损伤治疗提供了一种新的可能性。