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摘要流行性感冒是由流感病毒引起的人畜共患急性呼吸道传染病。流感病毒传播性高、变异快，除引起季节性流感外，每次大规模流行都给人类社会造成重大损失。流感防控技术的研究始终是一项极为重要而紧迫的工作，而流感病毒的检测是流感防控过程中必不可少的环节。<br>　　由于传统的流感病毒检测方法不能完全满足简便、快速和精准的应用需求，近年来，各种新兴技术相继被尝试应用于流感病毒的检测，但这些技术都会面临实际样品中病毒浓度低、成分复杂的问题，而高效的富集分离方法将有助于推进这些新兴技术在流感病毒检测中的应用。基于磁纳米粒子的分离纯化技术因其操作上的便利性已广泛应用于各个领域。在流感病毒富集检测方面，磁纳米粒子也表现出良好的性能，但目前报道的流感病毒特异性的磁纳米粒子主要依赖于抗体或适配体，这些生物大分子制品性质不稳定，不利于常温储存和操作，而且筛选和制备过程繁琐，耗时长，成本高。另外，流感病毒众多而且抗原变异快，现有的抗体或适配体无法应对所有的流感病毒。<br>　　HA和NA是流感病毒表面的两种重要蛋白，可分别与唾液酸寡糖和小分子药物扎那米韦特异性结合。我们通过共价键将唾液酸寡糖或扎那米韦分子修饰到磁纳米粒子表面，合成了两类糖基功能化的磁纳米粒子，并对其与流感病毒的相互作用及其在流感病毒富集检测方面的性能进行了研究，取得了以下成果:<br>　　1.发展了一种简单高效的磁纳米粒子表面化学修饰方法，成功合成了唾液酸寡糖和扎那米韦分子修饰的两类糖基磁纳米粒子。物理和化学性质分析表明磁纳米粒子表面负载有丰富的唾液酸寡糖或扎那米韦分子，且在水相中具有良好的单分散性和稳定性，同时具有超顺磁性以及强的磁响应能力。<br>　　2.证实了上述两类糖基磁纳米粒子可以高效结合HA和NA蛋白、各种亚型的流感病毒（包括H1N1、H5N1等）及副流感病毒。其中扎那米韦修饰的磁纳米粒子对流感病毒的富集分离具有广谱性，而不同唾液酸寡糖修饰的磁纳米粒子对受体特异性不同的流感病毒的富集分离具有选择性。<br>　　3.证实了两类糖基磁纳米粒子可以快速(＜30 min)、高效（富集效率＞92％）地从不同体积的液体样本中富集分离出各种流感病毒，而且磁纳米粒子具有良好的重复使用能力（≥6次）。<br>　　4.通过使用模拟流感病毒感染咽拭子样品以及采自医院和养禽场的疑似流感病毒感染的真实拭子样品（80例），证明了糖基磁纳米粒子富集分离预处理可以显著提高传统流感病毒检测方法(ELISA和PCR)的灵敏度;而且富集分离出的流感病毒可以直接通过热裂解释放病毒RNA，然后用于PCR，免去了传统复杂的RNA提取操作，从而大幅简化了PCR检测的操作过程。<br>　　5.初步探究了将糖基功能化金纳米粒子与量子点组成的荧光共振能量转移检测体系用于糖基磁纳米粒子富集分离出的流感病毒的检测，验证了基于糖基磁纳米粒子的富集分离方法可与其他新型流感病毒检测方法相结合。<br>　　本研究以糖基磁纳米粒子为工具，建立了一种快速、高效富集分离流感病毒的方法，有利于下游的流感病毒检测。与传统的免疫磁珠等相比，糖基磁纳米粒子具有制备简单、成本低、稳定性高、通用性强以及可以重复利用等优点。方便、快捷、精准的便携式现场检测技术是未来发展的方向，本研究发展的糖基磁纳米粒子由于其独特的性质便于集成化和自动化，为进一步开发流感病毒快检方法提供了理论支持和技术储备。