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摘要全球有近7100万丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)感染者，每年约有40万人死于慢性病毒感染引起的肝硬化和肝癌。目前只有DAA药物能够治疗HCV-1b引起的慢性肝炎，但因为感染者人数众多、DAA药物价格高昂、存在耐药性隐患等一系列限制因素，单纯的依靠DAA药物治疗无法彻底清除HCV病毒，疫苗仍是控制HCV传播最有效的方式。<br>　　前期研究工作中，我们发现HCV特异性T细胞反应与病毒的控制相关，并筛选鉴定出了多个中国人群中HCV-1b亚型特异性T细胞表位;此外，有文献报道E2结构蛋白亚单位疫苗在动物模型中显示出较好的免疫原性和保护性。所以，本研究拟开发研究HCV-1b特异性T细胞多肽表位和E2蛋白的联合疫苗。<br>　　首先，我们将从中国丙肝患者外周血筛选出的39条HCV-1b亚型特异性T细胞表位根据位置分为结构蛋白与非结构蛋白，通过-GPGPG-连接各表位组成相应的结构蛋白多肽表位重组蛋白(Structural protein epitopes，SPE)和非结构蛋白多肽表位重组蛋白(Non-Structural protein epitopes，NPE)，由原核表达系统表达后获得目的蛋白。将10μg蛋白与铝佐剂混合后，皮下免疫6-8周龄的雌性Balb/C小鼠，每两周接种一次，在第三次接种疫苗10天后处死小鼠，收集脾细胞并用ELISPOT检测IFN-γ表达水平。结果显示39条T细胞特异性表位多肽中有21条多肽能够有效刺激起IFN-γ反应，表明HCV-SPE蛋白及HCV-NPE蛋白能够有效刺激起T细胞免疫反应。同时，在这21条多肽中，有10条多肽序列是未经文献报道的，所以我们筛选鉴定出了新的T细胞特异性表位多肽。<br>　　在此基础上，我们将50μg E2蛋白与10μg HCV-SPE或HCV-NPE联合免疫小鼠，并辅以铝佐剂每两周接种一次，在第四次接种疫苗后第10天处死小鼠，分离小鼠脾脏细胞检测IFN-γ的表达水平，同时分离小鼠血清检测抗原特异性抗体的滴度以及中和抗体的反应强度。T细胞多肽表位和E2蛋白联合疫苗免疫实验的初步结果表明:联合疫苗未能刺激产生有效的T细胞反应，同时，虽能够刺激起抗原特异性的抗体但无法增强中和反应能力。<br>　　分析已有的初步实验结果，预期的“同时刺激起有效的T细胞反应以及中和抗体反应”这一实验目标未能实现，推断原因可能包括:1）抗原在递呈过程中的相互竞争与抑制、2）CD4T细胞的分化方向受限制、以及3）佐剂等因素对蛋白免疫原性的影响，因而进一步优化免疫原的组分以及免疫策略是联合疫苗开发的关键问题。