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摘要目的：<br>　　用不同方法测得MTAN、MTAN+EDTA对牙龈卟啉单胞菌、血链球菌、具核梭杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)，在此基础上研究二者对具核梭杆菌生物膜的抑制作用。<br>　　方法：<br>　　1.MIC和MBC的测定<br>　　按照二倍稀释法将MTAN、MTAN+EDTA稀释于96孔板后，加入等量的菌悬液，得到每孔中nisin浓度为1000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml、125μg/ml、62.5μg/ml、31.3μg/ml、15.6μg/ml、7.8μg/ml、3.9μg/ml、1.95μg/ml。阳性对照组：0.12％氯己定溶液;阴性对照组：无菌水。<br>　　1.1微量肉汤稀释法<br>　　将96孔板置于各自培养条件下培养48h，衬于深色背景下观察液体呈清亮的最小浓度即为MIC，取清亮各孔10μl十倍稀释法稀释后取10μl涂布于BHI琼脂培养基上无菌落生长的培养基对应的最小浓度为MBC。重复三次测平均值。<br>　　1.2OD值法<br>　　对稀释好的各孔混合液用酶标仪(630nm)测得原始OD值并记录，阴性对照组得到每孔中细菌生存数，取平均值。恒温培养箱中各自培养条件下培养24h，测定并记录各孔OD值，OD值变化小于0.05的最小浓度记为最小抑菌浓度(MIC)。得到大于MIC的各孔中细菌生存数，生存数降低大于99.9％的最小浓度为最小杀菌浓度(MBC)。重复三次取平均值。对24h后测得的OD值均值士标准差表示，用SPSS20.0软件对其进行单因素方差分析，LSD法对各浓度组和阴性对照组进行两两检验（检验水准α=0.05）。<br>　　2.MTAN、MTAN+EDTA对具核梭杆菌生物膜形成情况的影响<br>　　制备24片规格为4mm×4mm的牙骨质片，用无菌唾液包绕置于37℃恒温箱中24h，将已形成获得性膜的牙骨质片随机分放于24孔板中，分别加入等量的菌液和培养液，37℃恒温厌氧培养48h获得具核梭杆菌生物膜，用nisin浓度为125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml的MTAN和MTAN+EDTA处理24h，阴性对照为无菌水，阳性对照为0.12％氯己定，在扫描电镜下观察各牙骨质表面形成的生物膜形态。<br>　　结果：<br>　　1.MIC和MBC值的测定<br>　　MTAN、MTAN+EDTA均对三种菌的生长繁殖均表现出较强的抑制作用。两种方法测得的二者对三种菌的MIC和MBC值结果一致。统计学分析结果显示最小抑菌浓度以上的各组OD值同阴性对照组之间有差异，差异有统计学意义(P＜0.05)。MTAN对对牙龈卟啉单胞菌、血链球菌和具核梭杆菌的MIC分别为125μg/ml、31.3μg/ml和62.5μg/ml;MBC分别为500μg/ml、125μg/ml、250μg/ml。MTAN+EDTA对三种菌的MIC分别为62.5μg/ml、31.3μg/ml、31.3μg/ml;MBC分别为250μg/ml、125μg/ml、62.5μg/ml。<br>　　2.MTAN、MTAN+EDTA对具核梭杆菌生物膜形成情况的影响<br>　　SEM下观察阴性对照组生物膜致密，具核梭杆菌生长密集，菌体饱满。阳性对照组生物膜细菌数目明显减少，且呈散落分布。Nisin浓度为125μg/ml、250μg/ml和500μg/ml的MTAN及MTAN+EDTA作用后的具核梭杆菌生物膜细菌数目明显减少，随着nisin浓度的增加，可见菌体裂解破坏。Nisin浓度相同的条件下MTAN+EDTA组观察到的具核梭杆菌裂解增多，甚至出现菌体的消融。<br>　　结论：<br>　　1.本实验条件下，MTAN、MTAN+EDTA均对种植体周围炎致病菌血链球菌、具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌有较强的抑制作用，其中MTAN+EDTA抑制具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌体外生长的能力更强。<br>　　2.随着nisin浓度的增加，MTAN、MTAN+EDTA对具核梭杆菌生物膜的形成的抑制作用增强，在达到一定浓度时，生物膜的结构和菌体的形态均被破坏，其中MTAN+EDTA的破坏作用更强。