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摘要目的：矽肺的发生涉及多细胞、多因子的变化和相互作用，其中成纤维细胞转化成肌成纤维细胞是矽肺由炎症期转入纤维化期的关键。研究表明外泌体miRNAs介导的细胞间信号通路在矽肺的发病过程中可能发挥重要的作用。课题组前期对矽肺病人血清和SiO2粉尘刺激后巨噬细胞的外泌体miRNAs进行高通量测序，筛选出了9条具有差异性表达的miRNAs，miR-125a-5p是其中之一。为了进一步明确miR-125a-5p在成纤维细胞转分化的作用，体外实验观察了它在巨噬细胞外泌体中的表达及其对NIH/3T3细胞转分化的影响，为其作为矽肺潜在的生物标志物和治疗靶点提供参考依据和资料基础。<br>　　方法:1.细胞来源<br>　　小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）和小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)购自中国科学院细胞库。<br>　　2.巨噬细胞外泌体的鉴定<br>　　巨噬细胞无血清培养24h后，收集上清液用超速离心法提取外泌体，采用透射电镜、纳米粒子跟踪分析(nanoparticle trafficking analysis，NTA)和Western bolt对其进行鉴定。<br>　　3.SiO2粉尘对巨噬细胞外泌体及其miR-125a-5p的诱导作用<br>　　分为对照组、实验组(100μg/mL SiO2)，分别提取外泌体，NTA、Western bolt和qPCR检测外泌体及其miR-125a-5p的变化。<br>　　4.巨噬细胞外泌体及其miR-125a-5p对NIH/3T3细胞的影响<br>　　建立巨噬细胞与NIH/3T3共培养模型，分为对照组、SiO2刺激组（100μg/mL SiO2粉尘）和外泌体组（10μg/mL外泌体并且该组无巨噬细胞）。采用Western blot和免疫组化检测NIH/3T3细胞相关蛋白的表达。合成miR-125a-5p干扰物转染NIH/3T3细胞，分为mimics、mimics NC、inhibitor、inhibitor NC和对照组，采用qPCR和Western bolt检测细胞中collagenⅠ、α-SMA、smurf1和inhbe mRNA和蛋白的表达。<br>　　5.数据分析<br>　　采用SPSS25.0对数据进行统计分析，服从正态分布的计量资料数据以均数±标准差（(x)±s）表示，两组样本间差异的比较采用t检验（正态资料）;3组及以上样本间差异的比较采用单因素方差分析，涉及两两比较的采用LDS法检验分析。设α=0.05为检验水准。<br>　　结果：1.巨噬细胞外泌体的鉴定<br>　　透射电镜下观察外泌体呈圆形或茶托样结构;NTA结果显示外泌体的粒径98.4％粒子的粒径在30-150nm;Western bolt检测外泌体和细胞均表达TSG101和Alix，而Canlnxin只在细胞中表达，说明可从上清中成功提取外泌体。<br>　　2.SiO2粉尘对巨噬细胞外泌体的诱导作用<br>　　NTA显示SiO2粉尘刺激后，外泌体粒径变小浓度增加，差异具有统计学意义(P＜0.05);Western bolt显示外泌体标志蛋白TSG101和Alix表达量升高;外泌体中miR-125a-5p的表达增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　3.巨噬细胞外泌体及其miR-125a-5p对NIH/3T3细胞的影响<br>　　Western blot结果显示，与对照组相比24h、48h后SiO2组和外泌体组中collagenⅠ和α-SMA的表达量上升，smurfl和inhbe的表达量下降，差异具有统计学意义(P＜0.05)，与48h的免疫组化结果相同。Western blot和qPCR结果显示，mimics组collagen I和α-SMA蛋白及mRNA表达量上升，而smurf1和inhbe蛋白及mRNA的表达量下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。Inhibitor组collagenⅠ和α-SMA蛋白及mRNA表达量下降，而smurf1和inhbe蛋白及mRNA表达量上升，差异具有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　结论：SiO2粉尘能够诱导巨噬细胞外泌体分泌增多及其miR-125a-5p的表达也相应增加，miR-125a-5p通过下调smurf1促进NIH/3T3细胞向肌成纤维细胞转分化。