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摘要癌症长期以来一直是威胁人类生存及健康的重大疾病，实验室针对肿瘤细胞促增殖的特性做了许多相关研究，希望能够找到新的靶点治疗肿瘤。表皮生长因子受体（EGFR，Epidermal Growth Factor Receptor）下游通路十分复杂，产生促增殖、促存活、促迁移和抗凋亡等广泛效应。EGFR信号通路活化依赖于受体二聚化及胞内酪氨酸残基磷酸化等，EGFR通路的下调主要是通过EGFR内吞降解。在肿瘤细胞中，由于配体过量产生、EGFR基因扩增、EGFR转录水平上调及EGFR突变截短等导致EGFR组成型激活或不能内吞降解，从而使细胞过度增殖。许多蛋白可调控EGFR信号通路，对这些调控的深入理解有助于更好的设计靶向EGFR通路的药物。<br>　　GSDME(Gasdermin E)别名DFNA5，在1998年最早被鉴定为导致常染色体显性非综合性听力丧失的基因。GSDME蛋白具有自抑制结构，由N端发挥功能的结构域及C端起调节作用的结构域组成。当没有发生切割时，其N端活性被抑制。最近的研究发现，GSDME参与到细胞焦亡过程中，当细胞受到化疗药物刺激时，CASP3活化，GSDME作为CASP3的底物被切割，释放出GSDME N端片段，该片段可对质膜进行打孔，细胞渗透压发生变化最终胀破导致细胞焦亡。<br>　　在实验的过程中，发现敲低GSDME通过下调CCND1的水平抑制了细胞增殖。CCND1的表达受到多种因素调控，其中磷酸化的ERK1/2(Mitogen-Activated Protein Kinase1)可促进AP-1（Activator Protein-1）复合物的形成，起始CCND1的转录。我们的实验结果显示敲低GSDME后，ERK1/2的磷酸化水平下降，同时CCND1的蛋白水平也发生下调。<br>　　查阅BioGRID数据库发现，GSDME与EGFR可能存在相互作用。随后进行了co-IP实验，结果表明GSDME的N端片段可与EGFR的胞内结构域相互结合。进一步研究发现GSDME敲低通过泛素-蛋白酶体途径和自噬-溶酶体途径促进EGFR的内吞降解进而导致其下游RAS（RAS Proto-Oncogene）-ERK1/2通路下调。用免疫荧光的方法进一步探究，用EEA1标记早期内体，观察发现GSDME敲低后促进了EGFR从质膜向早期内体的转运。<br>　　EGFR胞内C末端调控其自身内吞降解的位点包括Y1045、Y1068及Y1086位点等。进一步的实验结果显示GSDME敲低后通过上调EGFR Y1045位点磷酸化水平促进c-CBL与其结合，进而促进EGFR降解，抑制细胞增殖。<br>　　GSDME具有自抑制结构，进一步实验发现GSDME N端片段作用与全长相反，GSDME N端片段促进了EGFR内吞降解。<br>　　GSDME除了对EGFR内吞降解有影响外，它是否会直接影响EGFR通路活性？由于GSDME可以与EGFR胞内结构域结合，猜测这种结合可能会影响EGFR二聚化。co-IP实验结果表明，GSDME全长可促进EGFR二聚化。进一步探究发现，GSDME全长可促进EGFR二聚化从而促进其胞内Y1173位点磷酸化，最终促进细胞增殖。<br>　　综上所述，本课题主要探究了GSDME通过EGFR调控非小细胞肺癌细胞增殖的分子机制，发现GSDME全长与其N端片段对EGFR信号通路具有不同的调控机制。细胞在正常生理条件或在化疗药物处理的条件下时，GSDME全长和N端片段分别发挥着增加EGFR蛋白稳定性和促进EGFR降解的功能，此外，GSDME全长还可以促进EGFR二聚化，从而促进其下游通路活化。