摘要目的:文献研究表明,miR-29b具有抑制肿瘤细胞增殖和迁移的作用,而CDK6可以促进肿瘤细胞增殖和迁移。研究骨肉瘤细胞中,miR-29b是否通过作用于CDK6抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移,为骨肉瘤的临床治疗进展提供理论依据,探寻骨肉瘤治疗新方向。<br> 方法:临床中选取无合并其他肿瘤、非复发、未放化疗的骨肉瘤患者,留取手术切除的骨肉瘤组织和瘤旁正常组织。通过Western blotting和qRT-PCR的方法测定骨肉瘤组织内CDK6蛋白及其mRNA,同时测定细胞内miR-29b水平,寻找miR-29b与CDK6相关性。使用网络共享的miRNA靶点预测软件,预测miR-29b的靶点为CDK6mRNA3'-UTR。通过pre-miR-29b重组质粒转染细胞,测定转染后细胞内CDK6蛋白水平,然后诱导细胞内CDK6mRNA3'-UTR突变,消除miR-29b的预测结合位点,接着再使用pre-miR-29b重组质粒转染,测定转染后细胞内CDK6蛋白水平,验证miR-29b靶位点是否为CDK6mRNA3'-UTR。最后,将pre-miR-29b重组质粒、pre-miR-control重组质粒、CDK6质粒及control质粒四种物质按照对照的原则组合,经脂质体包裹后进行基因转染体外培养MG-63细胞系,通过CCK8检测分析转染细胞的增殖能力,Transwell试验检测转染细胞的迁移能力。<br> 结果:(1)骨肉瘤组织中表达上调的是CDK6,而不是CDK6mRNA水平;(2)骨肉瘤组织内miR-29b与CDK6蛋白水平负相关;(3)确定CDK6mRNA3'-UTR是miR-29b的作用位点;(4)miR-29b作用于CDK6抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移。<br> 结论:在骨肉瘤细胞中,miR-29b通过作用于CDK6抑制肿瘤细胞增殖和迁移,为临床中骨肉瘤的治疗可能打开了新的思路。
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