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摘要肿瘤微环境是由多种基质细胞及细胞外基质成分共同构成的供以肿瘤生存、发展的复杂环境。肿瘤微环境对肿瘤的发生、转移、免疫逃逸等过程有着至关重要的影响。巨噬细胞占据实体肿瘤近一半体积，是肿瘤微环境中最重要的炎症细胞，其受肿瘤微环境中各种细胞因子和趋化因子的作用而被招募到肿瘤细胞周围，成为与肿瘤的发生发展密切相关的巨噬细胞，即肿瘤相关巨噬细胞（Tumor Associated Macrophages，TAMs）。TAMs是肿瘤炎性反应的主要调节者，不仅能够通过分泌多种细胞因子、蛋白酶类等影响肿瘤细胞的增殖、转移、血管生成及免疫抑制等过程，还可以通过分泌一种纳米囊泡，即外泌体，来影响肿瘤细胞的生理功能。<br>　　外泌体是包含蛋白、脂质及核酸等生物大分子的微小囊泡，可被下游靶细胞选择性的吸收进而影响靶细胞。目前对外泌体被下游靶细胞选择性吸收的原理有多种假说，但对其具体机理的研究少见报道。作为拥有脂质双分子层结构的独立单位，外泌体的膜蛋白一定在其与下游靶细胞的相互识别过程中发挥着重要作用，对外泌体膜蛋白质组的解析必定有利于加深对这一机制的认识。<br>　　本研究采用IL-4诱导巨噬细胞Ana-1成为TAMs，分别提取巨噬细胞Ana-1与极化后的TAMs外泌体膜蛋白，利用非标定量蛋白质组学技术对两者的组成进行定性和定量分析。Ana-1和TAMs外泌体膜组分分别鉴定到4489个和4341个蛋白，其中分别有14.3％和13.6％的蛋白含有跨膜结构域;Ana-1和TAMs外泌体膜的定量比较发现差异蛋白935个，其中TAMs外泌体膜组分中254个蛋白丰度升高，681个蛋白丰度下降。丰度升高的蛋白功能富集在代谢和DNA复制过程，而丰度降低的蛋白主要富集在蛋白转运与免疫反应。此外，本研究还对小鼠结肠癌细胞CT26条件培养基诱导Ana-1成为TAMs前后的外泌体膜蛋白质组进行了分析，并将IL4和条件培养基诱导的TAMs外泌体膜蛋白的变化进行了比较，发现两种不同的诱导方式获得的TAMs外泌体膜蛋白组成有较大差异，但两者相对与Ana-1均有32个蛋白丰度上调、106个蛋白丰度降低，提示这138个蛋白可能是TAMs外泌体的共同特征，与TAMs的诱导方式无关。<br>　　本研究进而利用Ana-1与TAMs外泌体膜蛋白分别孵育小鼠结肠癌细胞CT26后，收集CT26细胞膜蛋白质，采用Blue Native PAGE技术方法分离CT26细胞膜中的复合物，并对复合物进行质谱鉴定，通过与上述外泌体膜蛋白质组的鉴定结果的比较，发现可能与CT26细胞膜蛋白发生相互作用的外泌体膜蛋白。Blue Native PAGE共分离到2个CT26细胞膜蛋白质复合物，通过比较未处理的、Ana-1和TAMs分别处理的CT26细胞膜蛋白质复合物的组成，鉴定到39个与CT26细胞膜形成复合体的外泌体膜蛋白，其中有16个蛋白仅出现在Ana-1外泌体膜处理组，2个结果蛋白仅在TAMs外泌体膜处理组。39个外泌体膜蛋白中，有15个蛋白具有蛋白结合能力，有7个蛋白质——Hspa1a、Hd1bp、Hsp90ab1、Sptbn1、Larp1、Anxa1和Eef1g参与钙粘着蛋白结合介导的细胞间粘附，提示外泌体与细胞的的识别可能与细胞间粘附机制有关。