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摘要JAK/STAT信号通路调节细胞生长和分化等功能，在机体免疫应答和癌症发展中起到关键作用。寻找调节JAK/STAT信号通路转导的药物也是研究热点之一。中草药中含有的天然化合物，数目众多，结构各异。其中许多天然化合物被报道可以调节JAK/STAT信号通路，具有抗炎、抗肿瘤等活性，但是中草药及其含有的天然化合物起效的分子机制却未被完全揭示。因此，本论文的研究目的是从中草药化学成分里寻找可以调节JAK/STAT信号通路的化合物以及探究其作用方式，并且深入探讨中草药治疗人类疾病的可能分子机制。<br>　　第一部分探讨了天然产物衍生物P-13抑制STAT3信号转导的机制。利用STAT3调节依赖的荧光素酶报告基因筛选平台，对中草药植物天明精中的一系列天然分子及其衍生物进行检测，最终获得一个活性很好的化合物P-13。P-13是天然分子PCL的衍生物，属于倍半萜内酯。发现，P-13以剂量和时间依赖的方式抑制IL-6诱导以及组成型的STAT3活化。体外激酶活性分析表明P-13直接抑制JAK2激酶活性。P-13同时也抑制IFN-α诱导的JAK1和TYK2的激活，表明它是一个泛JAK激酶抑制剂。P-13对IL-6/STAT3信号转导的抑制作用能够被还原剂二硫苏糖醇或谷胱甘肽阻断，这表明靶蛋白上的巯基和P-13中的α，β不饱和羰基间发生了反应。进一步用蛋白质谱分析技术以及计算机分子对接拟合方法，揭示了P-13与JAK2的SH2结构域中的C452位点共价结合。还探究了P-13对JAK/STAT信号通路具有一定选择性。此外，P-13在体外抑制许多肿瘤细胞系的生长并诱导其凋亡，比如乳腺癌细胞，结肠癌细胞等。特别是对那些表达组成型活化的STAT3的癌细胞系的生长抑制作用更明显。它还能够抑制裸鼠体内的人源结肠癌细胞异种移植瘤的生长。总之，我们的实验结果揭示了天然产物衍生物P-13是一个含有迈克尔受体（α，β不饱和羰基）的JAK2的新型共价抑制剂，并且是一个有希望的抗癌候选化合物。<br>　　第二部分对中草药中普遍存在的、含有迈克尔受体（α，β不饱和羰基）的共价键化合物能否在半衰期较长的靶点蛋白上进行共价累积，从而治疗疾病的机制进行了探索。首先将8000多种天然植物，49种传统清热抗炎中草药植物以及21种经典抗炎中药方剂中含有的化合物，按照是否有α，β不饱和羰基结构进行分类。发现，含有该类结构的化合物约占所有天然植物中化合物的1/3;占清热抗炎中草药中化合物的1/5;占经典抗炎方剂中总化合物的1/4。几乎所有的方剂都含有该类化合物。说明共价键化合物在自然界以及在中药中普遍存在。利用炔基标记的含有α，β不饱和羰基的天然产物衍生物P-alk作为探针，通过CuAAC反应，来探究P-alk和不同蛋白的相互作用时间以及累积效应。在体外，发现，P-alk和蛋白的相互作用时间较短且差异较小。P-alk具有体积和重复给药累积效应。在体内，P-alk经过灌胃给药后，主要富集于肝脏中。在不同组织中，P-alk和蛋白间的相互作用时间不同。在肝脏中，虽然大部分蛋白和P-alk的相互作用时间较短，但是仍然有少数蛋白和P-alk的相互作用时间较长，例如和肝炎紧密相关的JAK2蛋白。发现P-alk能够剂量依赖地逆转ConA诱导的肝损伤。最后，以单次没有疗效的较低剂量P-alk进行重复给药，P-alk能够在肝脏JAK2蛋白上累积并逆转ConA诱导的肝损伤。因此，我们的研究结果揭示中草药中普遍含有α，β不饱和羰基的共价键化合物，能够在半衰期较长的靶点上，通过较低剂量重复给药进行累积。总之，我们的研究从分子水平揭示了中草药治疗人类疾病的一种新机制-共价累积。这项研究也给人们更好地开发利用中草药资源提供了新的理论指导。