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摘要在第一部分的研究中，我们讨论了逃避免疫杀伤是肿瘤的主要特征之一，上调肿瘤细胞表面的抑制性免疫检测点蛋白（包括PD-L1），是主要的手段。PD-L1蛋白被报道过表达于多种类型的肿瘤细胞表面，通过与肿瘤浸润淋巴细胞表面的PD-1受体结合抑制T细胞的效应功能。目前，阻断PD-L1/PD-1相互作用的单克隆抗体已在临床上被批准用于治疗多种类型的肿瘤，尤其是难治性或晚期肿瘤。然而，尽管抗体药物取得了巨大的成功，它们仍然存在诸多限制，比如自身带有免疫原性、不稳定性、高成本和弱组织渗透性等，这强调了开发小分子抑制剂的必要性。<br>　　为了有效地筛选靶向于PD-L1/PD-1检测点的小分子抑制剂，我们首先建立了一个可评估PD-L1/PD-1相互作用的体外共培养体系，由表达PD-L1的PC-9/PD-L1肿瘤细胞与表达PD-1的Jurkat/PD-1T细胞组成。我们发现两种细胞的共培养可促进PD-1通过溶酶体快速降解，在此过程中PD-1的降解程度与PD-L1/PD-1相互作用程度正相关，因此，共培养后PD-1的表达量变化可用以表征候选化合物阻断PD-L1/PD-1的能力。基于这一模型，我们筛选得到可有效阻断PD-L1/PD-1的先导化合物——007，它可随浓度/时间依赖性地抑制共培养后PD-1的降解。与anti-PD-L1Ab不同，007同时可抑制PD-L1蛋白的糖基化修饰，这显示它与阻断性抗体的作用机理不同。在进一步的机理研究中，我们发现PD-L1是007的直接作用靶点，007主要通过诱导合成早期的PD-L1在内质网中聚集，使其无法进一步分泌到高尔基体中，聚集的PD-L1最终通过ERAD通路降解致使膜上表达量下降，阻碍其与PD-1结合。PD-L1的分泌受阻同时伴随其糖基化修饰受阻。007的衍生物014被证实在体内模型中可有效抑制PD-L1的糖基化。我们的研究将为PD-L1/PD-1小分子抑制剂的结构优化提供指导，为免疫治疗方案带来改革。<br>　　在第二部分的研究中，我们讨论了Axl通路的上调是肿瘤恶化、转移的一种普遍机制，Axl被看作有潜力的开发抗肿瘤药物靶点。R428作为首个Axl特异性抑制剂被发现并进入临床试验，具有里程碑式的意义。虽然R428可有效抑制Axl酪氨酸激酶的磷酸化并诱导多种肿瘤细胞发生凋亡，但这两者间的关联仍存在许多疑问。我们的研究表明R428对Axl抑制只是瞬时性的，R428的抗肿瘤作用与它对Axl通路的抑制活性无关。为了阐释R428抗肿瘤的作用机理，我们从其诱导的胞质中异常起泡现象入手，发现R428可抑制溶酶体酸化和更新，从而导致溶酶体异常膨胀。与此同时，R428作用于自噬通路，其一方面诱导自噬相关基因的转录促进自噬的启始，另一方面又抑制自噬下游的降解，引起自噬体与溶酶体在胞内过度累积。通过小分子抑制剂或敲除的方式阻断自噬通路可削弱R428诱导的起泡和凋亡。我们的研究发现了除Axl磷酸化抑制外R428的新功能与作用机理，这将有助于在临床上更好的应用R428于抗肿瘤治疗中。同时，我们的研究也为自噬和凋亡的调控提供了新的认识。