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摘要急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)是血液系统的恶性肿瘤，是成年人急性白血病中最常见的类型。现阶段AML治疗仍以化疗为主，已持续近四十年，治愈率低且容易复发。AML患者常存在基因突变，这些基因异常与AML的发生以及预后不良密切相关。因此，急需寻找针对AML新的治疗策略。<br>　　研究表明，AML细胞常存在磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)信号通路异常激活。本论文从PI3K展开研究，检测一系列AML细胞株内各种PI3K亚型的表达情况，发现AML细胞普遍高表达PI3Kδ，而PI3K其他的亚型则有不同程度的表达，提示PI3Kδ可能是AML的潜在治疗靶点。然而，目前被FDA批准上市的PI3Kδ抑制剂CAL101仅对淋巴瘤有较好的治疗效果，对AML的疗效较弱，因此，本论文研究重点在于找寻其他分子靶点与PI3Kδ进行联合抑制来治疗AML。<br>　　约30％的AML成年患者中存在FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase3，FLT3)突变，这是AML患者中最常见的基因突变类型，所以FLT3已经成为治疗AML的重要分子靶点。然而，FLT3抑制剂单用一段时间后容易产生获得性耐药，因此，FLT3抑制剂同样需要联合用药策略来维持其治疗效果。于是，本论文首先研究联合抑制PI3Kδ和FLT3抗AML的作用。结果显示，PI3Kδ抑制剂与FLT3抑制剂联合用药，在FLT3激活的AML细胞株MV-4-11和EOL-1中存在协同增殖抑制作用，而对于不依赖FLT3信号通路存活的RS4;11和HEL细胞则没有协同抑制作用。在MV-4-11细胞中，进行PI3Kδ和FLT3的RNA水平共干扰实验，同样可以观察到这种协同增殖抑制作用。PI3Kδ抑制剂和FLT3抑制剂联合应用协同下调FLT3激活的AML细胞内AKT和ERK的磷酸化水平，并且协同诱导细胞凋亡。构建稳定表达野生型或存在串联重复突变的FLT3的32D模型细胞株并进行联合抑制PI3Kδ和FLT3的实验，进一步证明这种协同抗肿瘤效应仅在FLT3激活的细胞中出现。在MV-4-11和EOL-1裸小鼠移植瘤模型中，PI3Kδ抑制剂CAL101与FLT3抑制剂AC220联合应用有协同抗肿瘤作用，并且协同下调肿瘤组织AKT和ERK的磷酸化水平。上述结果表明，联合抑制PI3Kδ和FLT3对FLT3激活的AML有协同抗肿瘤作用。<br>　　早期临床试验发现，FLT3抑制剂单用一段时间后容易诱导FLT3酪氨酸激酶结构域出现点突变，从而导致对FLT3抑制剂耐药。本研究通过FLT3抑制剂sunitinib长期诱导，获得对FLT3抑制剂耐药的AML细胞株MV-4-11/su，并在该耐药细胞株中检测到FLT3的D835H点突变，而CAL101与FLT3抑制剂联合应用能够克服这种FLT3点突变引起的耐药。构建稳定表达同时存在串联重复突变以及D835Y或D835H点突变的FLT3的32D模型细胞株，发现FLT3点突变导致细胞株对FLT3抑制剂产生获得性耐药，而联合抑制PI3Kδ与FLT3能够克服所构建细胞株对FLT3抑制剂的耐药，进一步证明这种联合用药策略克服耐药的作用。因此，联合抑制PI3Kδ和FLT3可能成为针对AML有效的治疗策略，尤其对于已经出现FLT3抑制剂耐药突变的AML病人。<br>　　BCL-2（B cell lymphoma-2）蛋白在许多白血病细胞中高度表达，与肿瘤的产生及耐药密切相关，已成为抗肿瘤药物研发的新靶点。但是，临床研究结果表明，MCL-1(myeloid cell leukemia-1)高表达可能引起对BCL-2抑制剂耐药。于是，本论文接下来研究联合抑制PI3Kδ和BCL-2抗AML的作用。研究发现，联合抑制PI3Kδ和BCL-2对同时表达BCL-2和MCL-1的AML细胞有协同抗增殖以及促凋亡作用，克服MCL-1高表达细胞对BCL-2抑制剂的原发性耐药;对几乎不表达MCL-1的AML细胞则没有协同抗肿瘤作用。进一步研究发现联合抑制PI3Kδ和BCL-2协同抑制PI3K/AKT信号通路并下调MCL-1蛋白表达水平。联合抑制MCL-1和BCL-2对AML细胞的协同增殖抑制作用，进一步证实MCL-1在PI3Kδ抑制剂和BCL-2抑制剂联合用药产生协同抗肿瘤效应中有着重要的作用。因此，联合抑制PI3Kδ和BCL-2可能成为针对AML有效的治疗策略。<br>　　综上所述，本论文首次提出联合抑制PI3Kδ和FLT3对FLT3激活的AML有协同抗肿瘤作用，并能克服AML对FLT3抑制剂的获得性耐药;以及联合抑制PI3Kδ和BCL-2对同时表达BCL-2和MCL-1的AML有协同抗肿瘤作用。本论文为临床PI3Kδ抑制剂与FLT3抑制剂或BCL-2抑制剂联用治疗AML提供理论依据，为克服AML耐药提供新的治疗策略。